猪流行性腹泻病毒(PEDV)对养猪业的危害巨大,特别是在2010年后,随着变异毒株的出现,PED在全世界范围内暴发流行。为探究PEDV变异并流行的规律,对2017年采自北京某猪场的PEDV阳性样品BJsy13/2017进行了全基因序列分析。同时,对本实验室分离保存的的另外一株流行株SHpd/2012进行了组织病理学和细胞病理学研究。BJsy13/2017株的全基因组测序和分析:使用Oligo 7设计引物,将基因组分为22段,每段约800-3000 nt,分别PCR扩增并插入克隆载体PED-T中,转化扩增并测序。序列分析显示,该毒株与经典的CV777相比,同近年来国内其他的流行毒株类似,在S基因发生了基因重组现象,并与华东一带地区流行的PEDV毒株具有较近的亲缘关系,并对S蛋白进行了生物信息学分析。SHpd/2012株感染小型猪的组织病理学研究:选取12头5日龄的健康哺乳仔猪,分为A、B、C三组,每组4头,A组作为空白对照组,B(灌胃)、C(肌注)分别作为实验组进行攻毒。待实验组出现明显腹泻、呕吐临床症状后宰杀采样,并制作病理组织切片。结果显示,引发病变的器官包括肠道、肝脏和肾脏。肠的病变特征为肠绒毛的萎缩、上皮细胞大量脱落,同时肠管壁细胞发生水肿,胞内出现嗜伊红颗粒,管腔变小,并发现有炎性细胞的浸润。在肠道中发生的病理变化相对于其他器官的而言,病变的面积更大,病变的程度也更严重些。在肝脏,主要表现为肝细胞水肿和淤血等病变。在肾脏,肾小管上皮细胞出现脂肪变性和坏死。一些管腔内含有蛋白质物质,但未见炎性细胞浸润。而淋巴、脾脏和肺则未发现明显病变。SHpd/2012株感染Vero细胞的超微结构观察:将毒株接种Vero细胞,不同时间段收取细胞,制作超薄切片进行超微结构观察,发现在病毒感染初期(6 h),尽管细胞结构完整,部分Vero细胞线粒体、粗面内质网扩张,胞浆出现空泡;随着感染时间的增长(12 h),病毒粒子逐渐增多,细胞质内出现较多空泡状结构,病毒粒子先后出现在胞浆及细胞核内部;感染24 h后,病毒粒子数目显著增多,空泡化明显,出现细胞核分解,细胞融合更加明显;感染最后阶段(48 h),空泡化严重,核质固缩,细胞间大量融合,病毒粒子出芽排出。以上结果,为进一步了解PEDV的遗传演化规律和致病性提供了科学数据。