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目的:通过研究洛伐他汀(Lovastatin)对人卵巢癌细胞SKOV3的体外作用,观察洛伐他汀及其与顺铂(Cisplatin, DDP)联合对SKOV3细胞体外作用的影响,进一步阐明洛伐他汀抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡的可能机制,并探讨其用于卵巢癌治疗及化学预防的可行性。方法:1以不同浓度的洛伐他汀(Lov)作用于体外培养的人卵巢癌细胞SKOV3,采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay,MTT)比色法检测对该细胞增殖的影响;应用普通光学显微镜和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化;应用流式细胞仪分析洛伐他汀对SKOV3细胞周期分布和凋亡的影响。2应用免疫细胞化学(immunocytochemistry,IC)方法定性观察洛伐他汀处理48h后SKOV3细胞中Survivin、PTEN的蛋白的表达情况。采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)定量检测洛伐他汀处理48h后SKOV3细胞中Survivin、PTEN蛋白表达的变化。3采用MTT比色法检测洛伐他汀联合顺铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用,金氏公式[1]分析相互作用指数(Iteraction Index),评价联合后的作用;采用MTT比色法检测洛伐他汀与顺铂序贯应用对SKOV3细胞株的增殖抑制作用,寻求最佳给药方式。结果:1 MTT比色法显示洛伐他汀(1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L)对SKOV3细胞增殖具有抑制作用。不同浓度洛伐他汀处理细胞24-72h后,与对照组相比,各处理组OD值均有不同程度下降,且随洛伐他汀处理浓度的增大、作用时间的延长,OD值逐渐下降,差异具有显著性(p<0.05),即洛伐他汀对SKOV3细胞的增殖抑制作用呈明显的时间-剂量依赖效应。光学显微镜下观察未经洛伐他汀作用的SKOV3细胞为梭形,形态饱满;而经洛伐他汀作用48h后的SKOV3细胞变圆,皱缩,破裂,有的细胞两端出现细长的伪足,细胞胞浆中出现空泡,脱落细胞数目增多。经Giemsa染色光学显微镜下显示,对照组SKOV3细胞形态饱满,细胞核染色均匀,核仁清晰可见,未见凋亡细胞出现;而经洛伐他汀作用48h后的SKOV3细胞变圆,胞质浓缩,核着色不均匀,出现核碎裂现象,呈现凋亡细胞的形态学改变。在透射电镜下观察,正常SKOV3细胞形态较大,呈圆形,胞膜完整,表面有大量绒毛样突起。核质比例失调细胞核大,形态不规则,有1~3个核仁,内染色质丰富,无明显染色质边集。细胞质内细胞器丰富,可见内质网、线粒体、溶酶体等细胞器;经20μmol/L洛伐他汀作用48h后的SKOV3细胞呈现不同程度凋亡性变:细胞体积缩小,微绒毛减少,胞质浓缩,胞浆中出现较多空泡,线粒体脊和膜部分或大部分融合消失,粗面内质网扩张,有脱颗粒现象,胞核局部向外呈锐角突起,核染色质高度浓缩,电子密度增高,边集于核膜下,形成沿核膜的新月体状,有的出现核固缩。流式细胞仪检测细胞周期分布显示5、10、20μmol/L洛伐他汀作用SKOV3细胞48h后,随药物浓度增大,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少,差异具有显著性(p<0.05)。即洛伐他汀可阻滞SKOV3细胞周期进程于G0/G1期,该作用呈剂量-效应依赖关系。5、10、20μmol/L洛伐他汀作用SKOV3细胞48h后,出现典型的亚二倍体凋亡峰,依洛伐他汀浓度增大而逐渐升高,凋亡百分率分别为:7.90%、13.07%、22.55%,较对照组有统计学意义(p<0.05)。2免疫细胞化学检测结果显示:对照组SKOV3细胞中Survivin染色为阳性,细胞的胞浆呈现棕黄色颗粒,颗粒粗大;用药组染色强度明显减弱,颜色变淡,颗粒变细,阳性细胞数减少。对照组SKOV3细胞中PTEN染色较弱;用药组染色强度明显增强,颜色变浓,颗粒变粗大,阳性细胞数增多。流式细胞术检测结果显示:5、10、20μmol/L洛伐他汀作用SKOV3细胞48h后,SKOV3细胞中Survivin蛋白表达荧光指数(FI值)分别为0.907、0.759、0.329,PTEN蛋白表达荧光指数(FI值)分别为1.186、1.347、1.491,比较处理组和对照组的FI值,差异具有统计学意义(p<0.05)。3 MTT比色法分析洛伐他汀联合顺铂对SKOV3细胞的增殖抑制作用,结果显示:洛伐他汀可加强顺铂对SKOV3细胞的增殖抑制作用,且先给予洛伐他汀再应用顺铂比先给予顺铂再应用洛伐他汀对SKOV3细胞的增殖抑制作用明显,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:1 HMG-CoA还原酶抑制剂洛伐他汀具有抑制人卵巢癌细胞SKOV3增殖的作用,并呈浓度-时间依赖关系。2洛伐他汀阻滞人卵巢癌细胞SKOV3于G0/G1期并可诱导该细胞凋亡。3洛伐他汀可能通过上调PTEN和下调Survivin蛋白表达水平而发挥其抑制人卵巢癌细胞SKOV3增殖、诱导该细胞凋亡的作用,且PTEN表达与Survivin蛋白表达呈负相关。4洛伐他汀可增强顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3的增殖抑制作用,且先给予洛伐他汀再应用顺铂抑制增殖作用明显,为临床卵巢癌及其它肿瘤的序贯应用模式提供了实验依据。