【摘 要】
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目的:探索运动训练对大鼠骨骼肌收缩蛋白及肌球蛋白重链(MHC)亚型基因表达的影响,为进一步研究其蛋白水平及基因水平的变化机制提供依据。方法:选用清洁级健康雄性Sprague-Da
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目的:探索运动训练对大鼠骨骼肌收缩蛋白及肌球蛋白重链(MHC)亚型基因表达的影响,为进一步研究其蛋白水平及基因水平的变化机制提供依据。方法:选用清洁级健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(购于扬州大学比较动物中心)20只,6周龄,体重135~150g ,随机分为2组。A、安静对照组(Control,n=10),B、运动训练组(Heavy-load training,HT,n=10)。运动训练组:进行持续性大运动量跑台训练8周,安静对照组大鼠不做运动,运动对照组10只大鼠参照郑陆建立的大鼠运动模型方案进行运动。每次从15m/min开始,每5min速度增加5m/min,直至40m/min,保持此强度至力竭。运动训练组大鼠于末次运动训练后和安静对照组,在第二天晨用戊巴比妥钠腹腔或静注麻醉,宰杀,迅速选取股四头肌样本液氮保存。本实验使用SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯凝胶电泳),浓缩胶浓度5% ,分离胶浓度10%,电泳电压160V,时间200分钟。用实时荧光-PCR法,测定骨骼肌MHC I ,IIa,IIx,IIb四种亚型的mRNA基因表达。PCR反应条件:预变性:94℃,10min,变性:94℃,45s,退火:55℃, 45s,延伸:72℃, 1min,72℃, 10min。结果:在骨骼肌收缩蛋白SDS-PAGE后,运动训练组电泳图谱上出现大量新的条带,分子量范围为43~200 kDa,这就为在本运动模型下,蛋白水平上的后续研究提供了初步依据。另一方面,MHC亚型基因表达的实时荧光PCR测定发现,运动训练组和安静对照组大鼠相互比较,MHC I mRNA运动训练组明显高于安静对照组( P<0.05);MHC IIx mRNA及MHC IIa mRNA运动训练组和安静对照组大鼠比较,无明显差异(P>0.05);MHC IIb mRNA运动训练组亦明显高于安静对照组( P<0.01)。提示本运动模型下,各亚型的变化并不一致,具有选择性。结论:本运动模型下,在骨骼肌收缩蛋白SDS-PAGE后,运动训练组图谱上出现大量新的蛋白条带,这些新的条带是肌肉蛋白质的降解产物,还是为了修复运动损伤而合成的新的蛋白质片段,还有待后续研究;另一方面,MHC亚型基因表达的实时荧光PCR测定发现,运动训练组MHC I型mRNA及MHC IIb型mRNA明显增加,而MHC IIx mRNA及MHC IIa mRNA变化不明显,可见运动引起各亚型的基因表达变化不是均衡的,具有选择性,这就为下一步研究成肌调节因子的调节机制提供了依据。
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