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香蕉叶斑病可造成香蕉严重的产量损失。据报道,该病由多种病原真菌引起。近年来,广西香蕉产区新发现一种由突脐蠕孢(Exserohilumsp.)引起的叶斑病(突脐蠕孢叶斑病)。本文对该病进行病原分离,从形态学和分子生物学方面进行了鉴定,测定了该菌的生物学特性,并对该病的生物防治进行研究。主要研究结果如下:
1.从广西香蕉产区叶斑病样品上分离获得3株形态差异较大的菌株(CLER09、D087和JL05),按柯赫氏法则验证了其致病性。从形态学上将这3株菌株鉴定为突脐蠕孢(Exserohilumspp.),PCR扩增rDNA-ITS区的序列在GenBank序列库比对结果显示,3株菌株与E.rostratum在系统发育树中聚在同一分支上,自展值为99％。此外,基于Brn1基因构建的系统发育树也显示这3株菌株与E.rostratum聚类在一个分支上。结合形念特征和分子分析,将这3株菌株鉴定为E.rostratum。
2.分离获得的3株菌株的生长温度范围和最佳生长温度均相同,分别为7～40℃和28℃。菌株CLER09、D087和JL05的产孢温度范围分别为16～40℃、13～37℃和16～34℃,最佳产孢温度分别为34℃、28℃和31℃。3株菌株生长的pH值范围和最佳生长pH值均相同,分别为3.0～12.0和6.5。产孢pH值范围均为3.0～12.0,菌株CLER09和JL05最佳产孢pH值为7.5,菌株D087为7.0。
测定3株E.rostratum菌株对多种碳源和氮源的利用。除菊糖外,3株菌株均能利用20种测试碳源进行营养生长,甘油、乳糖和葡萄糖分别对菌株CLER09、D087和JL05的产孢最有利。3株菌株均能利用测试的27种氮源进行营养生长,L-苯丙氨酸对3株菌株的产孢均为最有利。
在供试的47科128种植物中,E.rostratum可侵染19科60种,占总测试植物数量的46.88％。3个菌株有相似的寄主范围,但在某些植物上的致病性存在差异。菌株JL05和D087可侵染番薯叶片,但CLER09不能侵染;菌株JL05可侵染鸭舌草叶片,但菌株CLER09和D087不能侵染。
3.黑光、紫外光和荧光对菌株CLER09和JL05的营养生长最好,黑光对菌株D087的营养生长最好。紫外光对菌株CLER09和D087的产孢诱导作用最强,黑光、荧光和绿光对菌株CLER09的产孢具有抑制作用,黑光对菌株D087的产孢具有抑制作用,所有测试光源对菌株JL05产孢均起到抑制作用。除绿光外,所有测试光处理对菌株CLER09的分生孢子的增长有促进作用,以紫外光最强。所有测试光源对菌株D087和JL05的短分生孢子增长促进作用显著,以紫外光最强。分生孢子的隔膜数与其长度具有正相关。光照对E.rostratum的分生孢子宽度影响较小。3个菌株经紫外光诱变前后的Brn1基因序列完全一致。光照条件下,短孢子增长幅度较长孢子大。
4.从不同环境中共分离到1372个微生物菌株,对E.rostratum有拮抗作用的菌株为235个。从中获得一株抗菌谱广的细菌菌株Mb1。结合形态特征、生理生化反应和16SrDNA序列同源性,将菌株Mb1鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderiacepacia)。菌株Mb1对香蕉突脐孢叶斑病菌的盆栽防效达到74.71％。