RASSF7在自体移植静脉组织中表达变化的实验研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiuxiang8288
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目的:  作为当代全球致死致残性疾病的主要组成部分,动脉硬化闭塞性疾病(Arteriosclerotic disease,AD)在我国的发病呈现逐年上升的趋势。旁路移植术是治疗冠状动脉及下肢动脉等周围动脉缺血性疾病的有效方法,但术后血管再狭窄严重影响了远期疗效,高达40%患者发生远期静脉血管再狭窄导致的狭窄。移植静脉血管再狭窄是一个多因素的过程,目前病因仍不清,血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)的增殖和迁移是其中重要的病理变化,和大多数细胞相似,它的增殖也受控于细胞周期调控蛋白。RASSF7基因是RAS原癌基因的效应蛋白RASSF家族中的成员,它于动物中广泛存在,并且在胚胎的发育及细胞周期调控和增殖、凋亡中有重要作用。本文分别在基因和蛋白水平检测了RASSF7在自体移植静脉中随时间的变化情况,并检测细胞增殖指标PCNA蛋白水平表达的变化,探讨RASSF7与血管组织中VSMC增殖及移植血管再狭窄的发生之间是否存在关系。  方法:  使用SD大鼠制作颈总静脉-肾下腹主动脉移植模型60只,正常饲养至术后7天、14天和28天时间点各20只处死,取移植后的静脉及对侧正常颈总静脉作为对照。HE染色观察形态变化,Real-Time PCR检测RASSF7在基因水平的变化,免疫组化染色与Western-blot蛋白印迹检测RASSF7在蛋白水平的表达变化趋势,Western-blot检测PCNA在蛋白水平表达及PCNA与RASSF7表达间关系。  结果:  1、组织学检查结果  HE染色结果可见:正常静脉的内膜仅由一层内皮细胞组成,而中膜为2至3层血管平滑肌细胞;在血管移植术后的静脉随时间延长,内膜和中膜的结构逐渐增厚,在14-28天时达到高峰。免疫组织化学染色可见:正常静脉中RASSF7阳性细胞很少,在移植术后7天静脉内开始有表达,14天时阳性细胞大量出现,28天达到高峰。正常静脉及术后7、14、28天的RASSF7阳性细胞率分别为(4.7±1.23)%、(19.6±1.67)%、(46.4±1.54)%、(58.5±2.87)%。术后7、14、28天与正常静脉阳性率的差异有统计学意义(P<0.05)。  2、Western-blot检测结果  正常静脉中RASSF7蛋白的表达量很少,术后移植血管中RASSF7蛋白的表达增多并呈逐渐表达逐渐增加的趋势,符合组织学检测结果。正常静脉,术后7、14、28天的蛋白光密度值为0.254±0.017、0.425±0.021、0.528±0.023、0.679±0.019,PCNA的光密度值分别为0.156±0.012、0.228±0.015、0.371±0.011、0.404±0.013,相关性分析结果显示RASSF7蛋白与PCNA蛋白的表达随时间变化成正相关(r=0.9173,P<0.01)。  3、Real-time PCR检测结果  Real-time PCR检测结果可见:正常静脉中RASSF7 mRNA表达量很少,术后7天、14天、28天的移植血管中的RASSF7 mRNA表达呈逐渐增高的趋势,分别为正常静脉中表达量的1.75、2.81、3.11倍,符合组织学及蛋白表达变化情况。  结论:  自体移植血管重塑过程中,RASSF7在移植术后7天,14天及28天在蛋白及基因水平表达均呈逐渐升高趋势,且蛋白水平的表达与增殖指标PCNA呈正相关。提示可能与VSMC增殖相关,或可成为防治移植术后血管再狭窄的新的靶点。
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