论文部分内容阅读
目的:课题组前期研究发现内源性多肽elabela 32、apelin 12、17、36激活APJ受体促进新西兰兔血小板聚集以及体外血栓形成。并使用细胞膜色谱技术筛选出能靶向作用于APJ受体的中药单体五味子甲素。本课题结合课题组前期研究,拟探讨五味子甲素能否通过APJ受体抑制elabela 32、apelin 12、17、36诱导的新西兰兔血小板聚集以及体外血栓形成,进一步分析线粒体自噬是否参与五味子甲素抑制elabela 32、apelin 12、17、36诱导的新西兰兔血小板聚集。课题从APJ受体的视角发现新型抗血小板聚集的药物,可能为血栓性疾病提供新的治疗途径。方法:1.用SYBYLE软件分析五味子甲素能否与APJ受体相结合;2.比浊法分析新西兰兔血小板聚集的程度;3.体外血栓检测仪分析新西兰兔体外血栓形成的现象;4.线粒体荧光探针标记新西兰兔血小板内线粒体并观察;5.透射电镜分析新西兰兔血小板内线粒体自噬的情况。结果:1.生物信息学分析发现五味子甲素与APJ受体的三个氨基(MET183,ARG168,LYS268)形成4个结合位点;2.五味子甲素(0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L)本身不影响新西兰兔血小板聚集,但是它可以浓度依赖性地抑制内源性促凝剂ADP诱导的新西兰兔血小板聚集;3.五味子甲素(0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L)能浓度依赖性地抑制elabela 32、apelin 12、17、36诱导的新西兰兔血小板聚集,并发现apelin 17的IC50值是最小的;4.五味子甲素(0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L)能浓度依赖性地抑制elabela 32、apelin 12、17、36诱导的新西兰兔体外血栓形成;5.线粒体荧光探针显示elabela 32、apelin 12、17、36减少新西兰兔血小板内线粒体的数量,而五味子甲素能逆转这种作用;6.通过透射电镜观察到elabela 32、apelin 12、17、36诱导新西兰兔血小板线粒体自噬,而五味子甲素能抑制elabela 32、apelin 12、17、36诱导的新西兰兔血小板线粒体自噬。结论:五味子甲素通过抑制线粒体自噬从而抑制elabela 32、apelin 12、17、36诱导的兔血小板聚集以及体外血栓形成。