神经干细胞相关抗原在SD大鼠脑及O-2A谱系细胞的表达研究

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第一部分神经干细胞相关抗原在SD大鼠脑组织的表达目的观察分析NG2、CD15与nestin在不同时期SD大鼠脑组织中的表达变化情况。方法将出生后7天和3个月的两组SD大鼠麻醉后进行灌注、固定、取脑,4%多聚甲醛后固定4小时后入10%、20%蔗糖脱水后,依照徐州医学院王平宇编著的《大鼠脑读片提要及图谱》进行冰冻切片。对神经干细胞相关抗原(nestin,CD15,NG2)和O-2A谱系特异性标记物A2B5分别进行免疫荧光组织化学染色研究,观察表达差异。结果7天组和3个月组的脑组织中,脑皮质和脑髓质中几乎观察不到nestin和CD15阳性细胞,而在SVZ和海马齿状回附近集中表达,表达量随着鼠龄的增长略微有些减少;NG2在不同脑区均有发现,与早期脑组织不同的是,成熟的脑组织在室管膜下区NG2表达减少,而在SVZ区周围的实质部分大量表达NG2。结论神经干细胞发育过程中会向脑组织周边迁移,表面抗原nestin消失的最快,其次是CD15,NG2发育过程中消失的最慢或者不消失。第二部分神经干细胞相关抗原在O-2A谱系胶质细胞中的表达目的观察分析神经干细胞相关抗原NG2、CD15与nestin在O-2A谱系胶质细胞中的表达变化情况。方法根据O-2A谱系细胞的生长时间差异及细胞的粘附特性不同,采用振荡法和差速贴壁法,并结合使用含生长因子的无血清培养基以获得纯化的O-2A祖细胞,将O-2A祖细胞用生长因子培养基诱导分化为T2A后,对培养1d和2d的O-2A和培养纯化1d和3d的T2A分别进行nestin,CD15,NG2和A2B5的免疫荧光检测。结果nestin在OPC(1d,2d)表达较强,在T2A培养早期(1d)也有表达但已稍减少(仅有70-80%表达),在T2A分化成熟阶段(3d后)几乎不见nestin表达。同样,CD15在OPC比T2A表达强,但有意思的是,在分化成熟的T2A中CD15虽表达减少但并未完全不表达。NG2在O-2A谱系(OPC、T2A)中均有较强表达。结论O-2A谱系胶质细胞在中枢神经系统发育过程中,其神经干细胞标记物的表达,随着细胞由未成熟至成熟状态而逐渐减弱,但不同神经干细胞标记物之间表达规律有差异。
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