低温胁迫给柑橘产业带来非常严重的经济损失。因此,提高柑橘抗低温胁迫的能力具有重要的意义。转基因技术是一种重要的育种途径,其前提是获得一些候选基因。本实验室建立了枳的低温基因表达文库,从中筛选出一些基因,包括PtrNINV。从枳中克隆该基因全长cDNA,构建进化树,预测亚细胞定位。分析它在不同胁迫条件和外源物质处理下的表达模式,构建表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化的方法将导入模式植物烟草中,获得转基因植株,对转基因株系在低温、高盐胁迫下的抗性进行分析,以鉴定该基因在抗逆方面的功能。主要试验结果如下：1.克隆了枳PtrNINv基因的全长cDNA序列,包含2037bp的开放阅读框,编码678个氨基酸。进化树分析,其亲缘关系与胡萝卜相近。亚细胞定位预测分析,它可能定位于线粒体中。2.实时定量PCR分析PtrNINV基因在高盐、低温、脱水不同胁迫和ABA、蔗糖、葡萄糖处理下的表达。结果表明,该基因能被以上处理诱导,但是它在不同的胁迫和处理条件下却具有不同的表达模式,干旱、盐、葡萄糖处理时,其表达量先降低,随后又逐渐升高,℃低温和外源ABA、蔗糖处理时,具有相反的表达趋势。几种胁迫处理中,该基因对低温和盐胁迫的响应最明显。3.构建了PtrNINV-pBI121双元表达载体,通过农杆菌介导的方法转化烟草,共鉴定出56株转基因植株。在7#、8#、22#、39#株系中超量表达。对7#、22#、39#三个株系和野生型株系(WT)的T1代进行500mmol/LNaCl处理,结果表明,在盐胁迫下,转基因株系比野生型表现较少的叶片黄化,以及低的丙二醛(MDA)积累、高的叶绿素含量。对转基因株系和野生型株系进行2℃低温处理,结果表明转基因株系的抗寒能力强于野生型,转基因株系叶片中的还原性糖和中性转化酶的活性高于野生型。