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研究目的: 构建针对C/EBP-β慢病毒质粒;转染肝癌细胞株SMMC-7721，筛选并培养稳定干扰C/EBP-β表达的SMMC-7721细胞株;进一步研究沉默C/EBP-β对肝癌细胞株SMMC-7721的细胞增殖、凋亡、迁移、细胞周期蛋白表达的影响。 研究方法: 1.利用慢病毒介导RNAi技术，设计针对C/EBP-β及eGFP（对照）shRNA序列，分别装入pLKO.1-TRC质粒，进行慢病毒包装，构建针对C/EBP-β和eGFP的慢病毒质粒，提取质粒并测序。 2.将已包装成功的sh-C/EBP-β和sh-eGFP慢病毒转染SMMC-7721，嘌呤霉素筛选并培养针对C/EBP-β稳定干扰的细胞株SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β及针对eGFP稳定干扰的细胞株SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP。Western Blot分别检测两组细胞C/EBP-β的表达情况。 3.CCK8法检测沉默C/EBP-β基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响。 4.Western Blot检测沉默C/EBP-β基因对肝癌SMMC-7721细胞周期蛋白Cyclin B1表达的影响。 5.Western Blot检测沉默C/EBP-β基因对肝癌SMMC-7721细胞抗凋亡蛋白Bcl-2及凋亡相关蛋白Bax的表达影响。 6.划痕实验及Transwell迁移实验检测沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721迁移能力的影响。 研究结果: 1.本实验包装的sh-C/EBP-β和sh-eGFP慢病毒具有感染肝癌SMMC-7721细胞细胞系能力，获得了针对C/EBP-β基因的稳定干扰细胞株SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β，针对eGFP基因的稳定干扰细胞株SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP。 2.Western Blot检测显示:与对照组SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP相比，pLKO-sh-C/EBP-β慢病毒可显著抑制SMMC-7721细胞内C/EBP-β的表达（P＜0.05）。 3.CCK8法检测显示:与对照组SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP相比，实验组SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β的增殖速度显著提高(相对增值率136.8％，P＜0.05)。 4.Western Blot检测显示:与对照组SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP相比，实验组SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β的周期蛋白Cyclin B1表达增强(P＜0.05)。 5.Western Blot检测显示:与对照组SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP相比，实验组SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β促进了抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P＜0.05)并抑制凋亡相关蛋白Bax的表达(P＜0.05)。 6.划痕实验及Transwell迁移实验显示:与对照组SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP相比，实验组SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β的迁移能力明显增强，迁移抑制率为-292.3％（P＜0.05）。 研究结论: 本实验成功构建pLKO-sh-C/EBP-β载体，并筛选出沉默C/EBP-β的稳定干扰细胞株;沉默C/EBP-β对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、迁移有促进作用，对其凋亡有抑制作用，且其细胞周期蛋白Cyclin B1表达升高。为初步阐明C/EBP-β在肿瘤发生发展机制中的角色及寻找恶性肿瘤靶点治疗的新方向，具有较大的理论和实际意义。