猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。高致病性猪蓝耳病(Highly Pathogenic Porcine Reproductiveand Respiratory Syndrome Virus，HP-PRRSV)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株引起的一种急性高致死性传染病，病毒致病力强，传播速度快，猪群发病率和死亡率高。本试验对我国部分省市地区HP-PRRS分子流行病学进行了初步分析并实现了NSP2蛋白原核表达及初步建立了检测PRRSV的间接ELISA方法。 本研究用细胞分离法从8省不同地区发病猪场猪组织病料中分离到28株PRRSV流行毒株。扩增并测序获得NSP2基因和ORF5基因片段序列，利用DNA Star软件对其进行核苷酸序列分析。分析表明28个分离株ORF5，NSP2基因序列自身之间同源性分别为94.7％～99.8％和86.4％～99.8％；与参考毒株VR-2332、MLV、BJ-4、CH-1a、HB-1、HB-2核苷酸序列同源性ORF5为86.2％～98.5％，87.7％～90.5％，87.4％～89.9％，90.2％～96.4％，95.2％～97.4％，90.9％～93.5％； NSP2为75.6％～98.8％，69.9％～99.4％，78.9％～99.1％，85.7％～92.3％，89.4％～97.7％，87.4％～96.2％，这说明国内流行毒株在NSP2和ORF5区域的变异较大且表明全部分离株均属于美洲型毒株。 本文参考Genbank中收录的猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome virus，PRRSV) JXA1株Nsp2基因的序列，设计了一对引物用于扩增截短的Nsp2(deleting Nsp2)基因，双酶切后将目的基因插入到原核表达载体pET-32a(+)中，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达，经SDS-PAGE电泳和Western-blot检测和可溶性试验证明，Nsp2得到了高效表达，融合蛋白的分子量约为36.5ku，表达产物以可溶性方式存在于表达上清液中，表达产物能被PRRSV抗体所识别，且具有较好的生物学活性。 用镍柱亲和层析法从上清中纯化了目的蛋白，以纯化后的目的蛋白作为抗原包被聚乙烯微量反应板，初步建立检测PRRSV的间接ELISA方法。通过特异性、重复性、符合性等试验及对临床样品检测的结果显示，该方法是一种较特异、敏感、快速、操作简便的方法。