论文部分内容阅读
α/βhydrolase domain containing（Abhd）基因是属于α/β水解酶超家族的一类基因。这一家族也是目前所知最大的蛋白超家族之一,它们在核苷酸和氨基酸序列上并没有很高的相似性,之所以被归为一个家族,是由于它们具有相似的高级结构,它们共有一个α/β水解酶折叠结构。研究发现,这类基因中几乎所有已知成员都参与了细胞重要的生化途径并与疾病有着直接或间接的关系。本文我们主要针对该家族中一未知α/βhydrolase domain containing（Abhd）基因-Abhd6的功能及它与癌症的关系进行了初步研究。Abhd6基因定位于3号染色体长臂14.3,cDNA序列全长2364bp（登陆号.NM020676）,第362到第1375个核苷酸为ORF区,开放阅读框编码一个由337个氨基酸组成的蛋白质,其中第98位到第322位氨基酸形成一个ABH结构域,即α/β水解酶结构域。人源和鼠源ABHD6无论在保守结构域,氨基酸顺序还是高级结构上都有极高的相似性。通过进化树构建,目前已发现的15种Abhd基因中,与Abhd6近缘且研究较多的两个基因是Abhd4,Abhd5,他们都是参与了中性脂代谢的脂酶。我们的研究发现,ABHD6在16种成人正常组织中广谱表达,其中肝,肾,卵巢等组织中表达量较高。而在我们使用的7种人类肿瘤细胞系中,ABHD6的表达与其正常组织有差异,如正常肝脏和脑组织中ABHD6表达量相对较高,而在肝癌和神经胶质瘤细胞系中的其表达量下降到较低水平。但进一步在正常肝细胞和4种肝癌细胞系中进行的研究并没有发现其表达量的明显差异。为进一步研究其功能及与癌症的相互关系,我们在AD293细胞中进行的细胞亚定位发现,和家族中许多其他成员一样,ABHD6-GFP融合蛋白主要分布在细胞质。原核表达6×His-ABHD6得到的融合蛋白浓度和纯度都较高,另外我们还利用流式细胞仪研究了过表达ABHD6对神经胶质瘤细胞周期的影响。结果虽然不明显,但仍然可以提供一些线索帮助我们进行后续的实验。