目的：　　研究表明，岩藻糖基转移酶Ⅱ(FUT2)可以催化α-1,2岩藻糖基化，与肿瘤的发展进程有着密切的关联。我们前期探究发现，FUT2在肺腺癌细胞中表达水平较高，并可以促进肺腺癌细胞转移，但其作用的分子机制尚不明确。本次实验将以肺腺癌A549、H1299细胞为主，探究FUT2对肺腺癌细胞EMT作用的分子机制，为肺腺癌的诊断及医治提供潜在的靶标。　　方法：　　（1）采用细胞转染技术，将FUT2的RNA干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-FUT2和对照载体pGPU6/GFP/Neo-shNC转入肺腺癌细胞，经过抗性药物筛选，构建FUT2低表达稳转细胞株。同理，将FUT2 cDNA表达质粒转入FUT2低表达A549细胞中，培养48 h，构建恢复FUT2表达的瞬转A549细胞，并运用Transwell小室实验检测其迁移、侵袭能力。　　（2）采用Western Blot检测EMT标志物E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的蛋白表达情况，以及TGF-β/Smad信号通路中TβRⅡ、p-Smad2、p-Smad3、Smad2、Smad2/3及转录因子Snail的蛋白表达情况。　　（3）将TGF-β1加入A549细胞，Western Blot检测Vimentin蛋白表达情况。　　（4）利用TGF-β/Smad信号通路抑制剂SIS3处理后，Western Blot检测EMT相关标志物E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达情况。　　（5）Lectin Blot检测糖蛋白TβRⅡ表达情况；免疫共沉淀(Co-IP)实验检测FUT2与TβRⅡ之间的关系。　　（6）建立裸鼠肺腺癌模型：将100μl (浓度为1×107/ml) A549细胞悬液通过裸鼠尾静脉注射于BALB/c-nu裸鼠体内。6周后取出肺组织，H&E检测肺组织结构变化，Western Blot检测肺组织中FUT2、E-cadherin、Vimentin的蛋白表达水平。　　结果：　　（1）通过G418成功筛选出FUT2低表达细胞株，蛋白检测结果表明，RNAi-FUT2组与未转染组、空载组相比，FUT2蛋白表达水平降低，E-cadherin的蛋白表达水平上调，Vimentin、N-cadherin以及TGF-β/Smad信号通路中TβRⅡ、p-Smad2、p-Smad3及转录因子Snail的蛋白表达水平均下降。　　（2）将FUT2 cDNA表达质粒转入低表达FUT2的A549细胞后，与RNAi-FUT2组相比，E-cadherin的蛋白水平下调，Vimentin、N-cadherin和FUT2的蛋白表达水平上调；Transwell小室实验结果表明迁移能力增强；Transwell基质胶实验结果表明细胞侵袭能力增强。　　（3）A549细胞和FUT2低表达A549细胞加入TGF-β1后，与相应细胞比较， Vimentin蛋白表达水平显著上调。　　（4）将经SIS3抑制剂预处理的A549和FUT2低表达A549细胞，分别再加入TGF-β1(5 ng/ml)，与未加入TGF-β1的对照组相比，E-cadherin的蛋白表达下调， Vimentin、N-cadherin的蛋白水平上调。而经SIS3抑制剂预处理后，RNAi-FUT2组与相应同处理的A549细胞相比，E-cadherin、Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平均没有明显变化。　　（5）凝集素实验(Lectin Blot)结果表明低表达FUT2的A549细胞中TβRⅡ岩藻糖基化水平显著降低，免疫共沉淀(Co-IP)实验结果表明FUT2与TβRⅡ存在相互作用。　　（6）尾静脉注射动物实验结果显示，注射A549细胞和转染空载A549细胞组裸鼠肺组织结构破坏严重；与对照组相比，注射转染FUT2低表达A549细胞组裸鼠肺组织中FUT2、Vimentin的蛋白水平下调，E-cadherin的蛋白水平上调。　　结论：　　（1）FUT2能促进肺腺癌细胞上皮细胞-间充质转化(EMT)；　　（2）FUT2通过TGF-β/Smad信号通路介导肺腺癌细胞EMT进程。