夏枯草抗HSV多糖的提取分离、结构鉴定及制剂学研究

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夏枯草属PrunellaL.植物,中医传统用药方法多为水煎,汤剂中含有大量多糖,现代研究表明,多糖具有抗病毒作用及免疫活性。夏枯草多糖研究报道较少,大多集中在水提醇沉粗多糖的药效研究方面。本研究对夏枯草中多糖进行提取、分离纯化、结构鉴定;并进行抗HSV作用、免疫活性研究;在明确结构和药效的基础上,还对夏枯草多糖温敏型凝胶进行了制剂学方面的研究,为开发创新性药物打下基础。 夏枯草用沸水提取,醇沉后得到粗多糖,粗多糖水溶解后经透析、高速离心,用DEAE-sepharoseF.F.柱,依次用水、0.2mol/L、0.5mol/L、1.0mol/LNacl溶液洗脱,得到四个多糖部位XKC00、XKC02、XKC05、XKC10,XKC02透析得到XKC02-A、XKC02-B。 采用高效凝胶渗透色谱法检测,结果表明:XKC00分子量为26000;XKC02-A分子量为136000;XKC02-B分子量为5600;XKC05分子量分布在8000-2200000,主要为2100000、660000、7000部分;XKC10分布在7000-2000000,主要为2000000、150000、7000部分;其中XKC00、XKC02-A、XKC02-B为均一分子量多糖。糖组成测定结果表明:XKC00是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖六种单糖残基组成,比例为0.14:0.37:0.53:1.47:1.49:1.00;XKC02-A也是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖六种单糖残基组成,比例为0.20:0.46:1.56:0.14:0.50:0.27。甲基化分析结果表明,XKC00中Ara位于非还原末端,Rha以末端或1,3-连接形式存在,Xyl则主要以1,4-连接形式存在,在部分2位上有分枝,该多糖中主要成份为己糖,它们中Man和Glc主要以1,4-或1,2-连接形式存在,在部分1,4-连接的Man的6位有分枝,Gal则主要位于非还原末端,或以1,6-连接的形式存在;除1,3连接的Rha外,XKC00中不含其他1,3-连接的糖残基。过碘酸盐氧化结果表明XKC00中存在较多1,4-连接的己糖,存在末端1,2-或1,6-连接的己糖或位于末端的戊糖,结果和甲基化分析结果基本吻合。XKC0013CNMR谱分析结果表明该多糖中具有α构型的Araf、Glap和β构型的Xylp、Manp、Glcp。 抗HSV实验结果表明,水提醇沉粗多糖对细胞无任何保护作用;纯化后多糖各部位在48小时内均能不同程度减轻CPE。淋巴细胞增殖转化试验结果表明:夏枯草多糖XKC-C、XKC00、XKC02、XKC02-A、XKC02-B、XKC05、XKC10体外均能明显促进淋巴细胞转化增殖,且有明显的剂量依赖性。细胞因子诱生试验结果表明,夏枯草多糖XKC-C、XKC00、XKC02、XKC02-A、XKC02-B、XKC05、XKC10均能明显诱生IFN-γ。 对夏枯草多糖温敏性凝胶进行了制剂学方面的研究,通过胶凝温度和体外释放性能研究,最终确定了17%F127/2~3%F68的处方组成,该处方制得的凝胶外观通明,室温流动性好,接触皮肤或粘膜后,在体温作用下迅速胶凝,有利于药物充分接触用药部位,维持用药部位的药物浓度,泊洛沙姆作为一种非离子表面活性剂还可促进多糖类药物的吸收。 本研究首次对夏枯草水溶性多糖进行了系统研究,得到了三个均一分子量多糖,并进行了相应的结构分析;首次对纯化的夏枯草多糖的抗病毒、免疫活性进行了研究,明确其抗HSV作用可能不是由对病毒的直接作用引起的,而是促进淋巴细胞转化增殖和诱生干扰素等免疫调节作用的结果;首次采用泊洛沙姆407作为基质,进行了夏枯草多糖温敏性凝胶的制剂学研究,为单纯性疱疹感染提供了新的治疗途径。为中药夏枯草的临床应用以及进一步开发创新性药物,提供了物质基础研究及药效学、制剂学依据。
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