使用流式细胞术与实时定量PCR检测小儿急性B淋巴细胞白血病微小残留病

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第一篇;背景:复发是小儿急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)治疗失败最重要的原因,并且治疗强度的增加导致了治疗相关毒副作用的增加.近年来,许多大规模前瞻性的临床研究表明微小残留病(MRD)是一个独立的预后因素.我们使用流式细胞术(FC)与实时定量PCR(RQ-PCR)对小儿B-ALL的MRD进行了检测.我们还使用定量流式细胞术评估了小儿B-ALL周期蛋白D3(cycl i n D3)的表达,探讨了其能否作为白血病相关抗原应用于小儿B-ALL的MRD检测.第一章四色流式细胞术检测小儿急性B淋巴细胞白血病MRD的研究;目的:研究采用流式细胞术检测小儿急性B淋巴细胞白血病MRD的方法,讨论其临床的预后价值,并探讨对于无有效抗体组合的患者使用流式细胞术检测的价值.方法:将患者初治时的免疫表型与多份正常骨髓标本的检测结果进行对照,以能将白血病细胞与正常骨髓细胞因分布位置明显不同而区分开来的抗体组合定为有效抗体组合,随后使用有效抗体组合对患者随访期标本进行检测.我们对36例具有有效抗体组合的小儿B-ALL患者缓解后的骨髓标本进行了检测.对6例无有效抗体组合的患者,我们使用CD45/CD19/CD34/CD10与CD45/CD19/CD20/CD22两个抗体组合进行检测,重点观察各CD1 9(+)细胞亚群的分布.将复发患者检测结果与定性PCR的结果进行比较.第二章使用定量流式细胞术检测周期蛋白D3在小儿急性B淋巴细胞白血病中的表达;目的:研究小儿B-ALL细胞与正常骨髓中CD19(+)淋巴细胞的cycli nD3的荧光表达强度,探讨其能否应用于小儿B-ALL的MRD检测.方法:使用rai nbow测量微球与平均荧光强度指数测量了B-ALL白血病细胞、正常对照骨髓与急性粒细胞白血病缓解期骨髓中的CD19(+)细胞的cycli nD3的荧光表达强度.第三章TCR δ胚系通用Taqman探针在检测小儿急性B淋巴细胞白血病微小残留病中的应用;目的:研究使用TCR δ胚系通用Taqman探针检测具有TCRδ重排的小儿急性B淋巴细胞白血病MRD的可行性;进一步使用RQ-PCR检测患者达到完全缓解后不同时间点的MRD水平.
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