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背景:脑卒中(Stroke)又称“中风”,是一种急性脑血管疾病,由脑部血管突然破裂或血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起的脑组织损伤或功能障碍。数据显示,脑卒中不仅发病率高,而且致残率也高,严重影响患者的身体健康和生活质量。脑卒中是引起吞咽困难最常见的原因之一,脑卒中后50%以上的病人出现吞咽困难。吞咽困难不仅影响患者进食,引起营养不良等症状,同时还可增加误吸及肺部感染的发生机率,延长了患者的住院时间,提高患者的死亡率。目前对于脑卒中后吞咽困难的治疗以康复训练为主,或辅以中药和针灸治疗。然而系统的个体化的康复训练对医护人员要求高、成本高且患者不易坚持,针灸疗效虽好但操作具有一定危险性,中药内服更是由于本身吞咽困难的症状易致呛咳等的发生。临床上通咽喷雾剂(含生姜、威灵仙等)口咽部外用,显示其对脑卒中后吞咽困难具有良好的作用效果,具有操作简单,局部用药作用迅速、无副作用等优点,但是其作用机制尚不明确。研究目的:探究通咽喷雾剂治疗脑卒中后吞咽困难的作用机制,为该药物的临床推广运用提供理论依据。研究方法:1.携带TRPV1受体基因的质粒转染HEK293细胞后,采用全细胞膜片钳技术检测通咽喷雾剂对TRPV1受体的激活作用。对比通咽喷雾剂与所含生姜的有效成分6-姜酚引起TRPV1跨膜电流强度的变化。2.雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和药物组,后两组采用线栓法短暂性阻塞大脑中动脉90min建立脑卒中后吞咽困难模型,药物组给予通咽喷雾剂滴舌治疗14天,张力转换器连接大鼠颈部二腹肌前腹,检测造模后第7天、14天各组大鼠在30s内由蒸馏水引发的吞咽次数和吞咽反应时间。3.通咽喷雾剂治疗14天后,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠血清P物质(Substance P,SP)含量、血清降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide.CGRP)含量。免疫组化法检测各组大鼠延髓孤束核内SP、5-羟色胺(5-HT)含量。研究结果:1.全细胞膜片钳实验1.1通咽喷雾剂设立1:1000、1:500、1:200和1:100四个稀释浓度。相对于静息状态TRPV1引起的电流变化,除1:1000浓度外1:500、1:200、1:100浓度均可激活TRPV1受体,引起电流变化(P<0.05)。且随着浓度的增加引起的TRPV1电流呈现峰值增强趋势。1.2根据通咽喷雾剂中生姜含量设立6-姜酚0.04mM、0.08mM、0.2mM和0.4mJM四个检测浓度。与静息状态相比,四个浓度6-姜酚均可引起TRPV1电流变化(P<0.05),随着浓度的增加所引起的TRPV1电流峰值呈现增强的趋势。1.3各稀释浓度通咽喷雾剂对应所含6-姜酚浓度,以30μM辣椒素引起的TRPV1电流变化为基准,分别计算通咽喷雾剂、6-姜酚引起TRPV1电流峰值变化与30μM辣椒素引起TRPV1电流峰值变化的比值,即TRPV1电流变化比值=(样品引起TRPV1电流峰值-阴性对照电流峰值)/(辣椒素引起TRPV1电流峰值-阴性对照电流峰值),依据此比值比较通咽喷雾剂、6-姜酚对TRPV1激活作用的差异。四个浓度6-姜酚分别较相对应稀释浓度通咽喷雾剂所引起的TRPV1电流变化比值增大(P<0.01)2.动物实验造模后第7天各组大鼠吞咽次数及吞咽反应时间差异均无统计学意义。造模后第14天,与正常组比较,模型组大鼠吞咽次数减少(P<0.01)、吞咽反应时间延长(P<0.05),血清SP含量、CGRP含量降低(P<0.01)、延髓孤束核内SP及5-HT阳性神经纤维含量减少(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,药物组吞咽次数增加(P<0.05),血清SP、CGRP含量增加(P<0.05),延髓孤束核内SP及5-HT阳性神经纤维含量增加(P<0.05,P<0.01)。结论:1.通咽喷雾剂可激活TRPV1受体,其对TRPV1受体的激活作用在一定浓度范围呈现随着药物浓度增加而增强的趋势;6-姜酚单体激活TRPV1受体跨膜电流的作用均大于通咽喷雾剂复方激活TRPV1受体引起的电流变化。2.采用线栓法短暂性阻塞大脑中动脉90min,可在手术后第14天检测到大鼠30s内由蒸馏水引发的吞咽次数减少,吞咽反应时间延长,故可作为脑卒中后吞咽困难的动物模型。3.通咽喷雾剂治疗14天,可增加短暂性大脑中动脉阻塞(tMCAO)大鼠由蒸馏水引发的吞咽次数,其作用机制可能与激活TRPV1受体,增加外周及中枢SP分泌、增加孤束核内5-HT阳性神经纤维含量,使得神经兴奋性增强,导致脑干吞咽中枢达到阈下兴奋的水平增高进而促发吞咽反射。同时TRPV1的激活增加舒血管物质CGRP的分泌,有助于脑部血管舒张,促进血管新生,有助于脑缺血的改善。