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目的:利用宫内缺氧缺血性脑损伤动物模型,探讨脑损伤后不同复氧时间胎鼠脑组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)在mRNA和蛋白水平的表达规律。
方法:将32只孕19天Wistar大鼠,按受孕先后顺序分为1个对照组及7个实验组,每组4只。在水合氯醛麻醉下行开腹,暴露双侧子宫,对照组只暴露双侧子宫15分钟,随即取胎鼠脑组织;实验组央闭子宫动脉15分钟,即建立宫内缺氧缺血性脑损伤动物模型,分别于双侧子宫恢复血供后0、2、4、8、12、24及48小时取胎鼠脑组织。应用HE染色光镜下进行病理观察,以确定动物模型是否建立成功。应用Real-Time PCR方法检测HIF-1α及VEGF的mRNA表达;应用免疫组织化学法检测HIF-1α及VEGF的蛋白表达定位。
结果:1.HE染色光镜下结果:对照组未见明显病理改变;实验组出现不同程度的细胞体肿胀,细胞排列紊乱等病理改变,可见动物模型建立成功。2.Real-TimePCR检测结果:对照组及各实验组均检测到HIF-1α及VEGF mRNA。(1)HIF-1α mRNA在对照组的2(-△△Ct)值为1.025±0.263:在0、2及4小时组的2(-△△Ct)值分别是1.067±0.267、1.240±0.372及1.176±0.280,三组与对照组比较无统计学意义;在8及12小时组的2(-△△Ct)值分别为1.375±0.273及1.450±0.151,两组与对照组比较,明显升高:在24及48小时组的2(-△△Ct)值分别为0.954±0.116及0.989±0.222,两组与12小时组比较,明显降低,与对照组比较无统计学意义。(2)VEGF mRNA在对照组的2(-△△Ct)值为1.004±0.097,;在0、2及4小时组的2(-△△Ct)值分别是1.027±0.477,1.279±0.176及1.373±0.337,三组与对照组比较无统计学意义;在8及12小时组的2(-△△Ct)值分别为1.524±0.217及1.770±0.359,两组与对照组比较,P＜0.05,明显升高;在24及48小时组的2(-△△Ct)值分别为1.062±0.272及1.073±0.053,两组与12小时组比较,P＜0.05,明显降低,与对照组比较无统计学意义。3.免疫组织化学法检测:(1)对照组HIF-1α蛋白几乎不表达,实验组HIF-1α蛋白主要在大脑皮层及海马等区神经元细胞的细胞核及细胞浆中表达。VEGF在大脑皮层及海马等去神经元细胞的细胞浆中表达。(2)HIF-1α蛋白在对照组平均光密度值为0.2902±0.0223,在0、2及4小时组的平均光密度值分别是0.2994±0.04176,0.3060±0.04053及0.3086±0.03960,三组与对照组比较无统计学意义;在8及12小时组的平均光密度值分别为0.3276±0.00631及0.3638±0.02168,两组与对照组比较,P＜0.05,明显升高;在24及48小时组的平均光密度值分别为0.2856±0.00814及0.2808±0.00415,两组与12小时组比较,P＜0.05,明显降低,与对照组比较无统计学意义。(3)VEGF蛋白在对照组平均光密度值为O.2034±0.0053,在0、2及4小时组的平均光密度值分别是0.2096±0.0057,0.2070±0.0059及0.2096±0.0079,三组与对照组比较无统计学意义;在8及12小时组的平均光密度值分别为0.2280±0.0093及0.2479±0.0077,两组与对照组比较,P＜0.05,明显升高;在24及48小时组的平均光密度值分别为0.1969±0.0034及0.1970±0.0054,两组与12小时组比较,P＜0.05,明显降低,与对照组比较无统计学意义。
结论:无论在mRNA水平还是在蛋白水平,HIF-1α及VEGF在宫内缺氧缺血性脑损伤的胎鼠脑组织中的表达随着复氧时间的延长均呈现先升高后降低的趋势,于8小时明显升高,12小时达到高峰,24小时后降至正常水平。