为了探究脂肪酶盖子结构域对其催化底物特异性的影响,本研究将Burkholderia sp. ZYB002菌株脂肪酶LipA活性中心上方的α-螺旋盖子结构,分别与Ophiostoma piceae胆固醇酯酶（OPE）、 Candida rugosa脂肪酶Lip2和C. rugosa脂肪酶Lip3的对应结构域进行置换,构建出五个脂肪酶LipA的突变体,并进行了脂肪酶突变体的纯化及酶学性质的初步分析。具体实验结果如下：1、以Burkholderia cepacia脂肪酶LipA的3D结构模型（PDB登入号：3LIP）为模板,模拟构建出Burkholderia sp. ZYB002菌株脂肪酶LipA的三维结构模型；将该脂肪酶LipA的盖子结构分别置换为OPE、Lip2和Lip3的对应盖子结构域,经评估后获得了5个盖子结构置换突变体模型,依次命名为：BCL-LOPE1、BCL-LO PE2、BCL-LLip2、BCL-LLip31 和 BCL-LLip32。2、针对上述突变体模型,依次设计引物,利用重叠延伸PCR技术,构建上述5个脂肪酶突变体的突变基因序列,并测序验证。3、经过His Trap^TM FF亲和柱和Hi Trap DEAE FF离子交换柱两步纯化得到纯化后的野生型脂肪酶 LipA/LipB复合物。突变体脂肪酶采用His Trap^TM FF亲和柱和Hi Trap^TM henyl FF （low sub）疏水柱两步纯化程序,获得了纯化后的4个脂肪酶突变体的LipA/LipB复合物（脂肪酶突变体BCL-LLip32的LipA/LipB复合物未能获得）。4、测定了野生型脂肪酶LipA与4个脂肪酶突变体粗酶水解4一硝基苯月桂酸酯的K_m和 Vmax （BCL-Llip32旨肪酶突变体未能进行检测）。试验结果表明：脂肪酶突变体BCL-LOPE2的‰为0.14±0.03 mmol/L,而野生型脂肪酶LipA的K_m为0.17±0.03mmol/L,其余脂肪酶突变体的K_m均高于野生型,较野生型脂肪酶LipA与底物的亲和性弱。4个突变体脂肪酶的最大反应速度V_max均有所降低。