灵芝,作为中国传统中药,活性成分丰富,具有很大的研究价值。其中灵芝酸A(GA.A)是一种三萜类化合物,具有抑菌抗癌活性。然而GA.A作为次级代谢产物,产量不高;因其水溶性低,药物利用度也大大降低。因此,本文主要对提高灵芝酸的产量和使用效率方面进行研究。室温常压等离子体(ARTP)诱变是一种新型安全高效的诱变系统,试验采用该系统对灵芝菌株(沪农1号)菌丝体进行诱变处理,根据菌丝表型、长速、随机引物扩增及拮抗线试验筛选突变菌株,并检测菌丝产量及灵芝酸产量。热敏脂质体(LTSL)作为一种纳米材料,可以改善所携带药物的极性并提高药物利用度,被广泛应用在生物学、医药学领域。为了提高GA.A的药物利用度,试验制备了修饰纳米金棒的灵芝酸A热敏脂质体(Au-LTSL-GA.A)。对其物理、化学性质进行检测,并进一步研究了 Au-LTSL-GA.A的体外抑菌及抗癌活性。本文的研究结果如下:(1)ARTP诱变灵芝菌丝体的最佳诱变时间为50 s;初步筛选出ATP3为突变菌株,且发酵培养后菌丝产量及灵芝酸产量与出发菌株相比,均明显提高。(2)Au-LTSL-GA.A呈球形,直径约400nm带负电荷,包封率良好,近红外光(NIR,880 nm0.25 W/cm2)照射后,可自发完成GA.A的释放。(3)抑菌试验筛选出耐药型大肠杆菌及金黄色葡萄球菌为目标细菌,Au-LTSL-GA.A+NIR对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的MIC值分别为9.3±0.26 μg/mL和7.5±0.62 μg/mL。CFU及LIVE/DEAD试验表明了相同药物浓度的Au-LTSL-GA.A+NIR比GA.A的抑菌活性更强,且抑菌效果随药物浓度增加而增加。SEM及超薄切片试验进一步研究了潜在的抑菌机制:Au-LTSL-GA.A可以进入细胞内释放GA.A,从而破坏了细菌完整性引发死亡。(4)抗癌试验通过MTT检测筛选出人乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,Au-LTSL-GA.A+NIR处理细胞的IC50为12.1±1.3μg/mL。细胞形态观察、实时细胞分析(RTCA)及LIVE/DEAD检测了药物的细胞毒性,流式细胞术检测了细胞凋亡率,结果均显示Au-LTSL-GA.A+NIR有较强的细胞毒性。本研究证明了 ARTP对药用真菌诱变育种的潜力,为药食用真菌诱变提供了新方法新经验。Au-LTSL-GA.A的研究,也为中药活性成分的纳米化修饰提供思路,其抑菌抗癌活性为医疗卫生领域增添力量。