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高迁移率族蛋白（high mobility group protein，HMG）是一系列的染色体非组蛋白，普遍存在于真核细胞中。根据HMG蛋白不同序列的相似性以及与DNA结合的特性可将经典的HMG蛋白分为三类:HMGA，含有AT-hook结构域;HMGB，含有HMG-box结构域;HMGN，含有独特的核小体结合结构域。HMG-box高度保守，含有一个特征性的DNA结合结构域，即可由大约80个氨基酸形成3段α螺旋成“L”型折叠，其可插入到DNA小沟处并与DNA小沟相结合。包含有HMG-box的HMGB蛋白在细胞核内发挥着重要的作用，如参与DNA复制，转录，修复，重组，细胞的分化，凋亡等。嗜热四膜虫（Tetrahymena thermophila）是一种单细胞的原生动物，具有核二态性，即一个二倍体的生殖小核和一个多倍体的体细胞大核。在四膜虫内，两种不同的HMGB家族蛋白HMG B和HMG C已经被研究，HMG C只定位于大核，HMG B在大核和小核中都存在，并且HMG B可能参与DNA复制。 本研究从四膜虫基因组数据库中鉴定了一种新的包含有HMG-box的基因HMGB3，对其结构及其定位进行了分析，获得的主要结果如下：⑴HMGB3的生物信息学分析HMGB3(TTHERM_00155590)拟编码670个氨基酸，在其N端含有一个HMG-box结构域，中间区域富含碱性的丝氨酸赖氨酸，C端则是一个中性的结构域，磷酸化分析表明C端结构域的S598，S602，S603，S612，S614，S615和S6167个位点可能被磷酸化从而形成一个酸性的C端结构域。RT-PCR结果表明HmgB3在营养生长时期只有很低的表达，在接合时期上调并在2～4 h达到最高值，这与Microarray分析的结果相一致。⑵HmgB3在细胞内的定位构建含有HA-tag的表达载体pBX-HA-HMGB3，并将其成功转化四膜虫细胞CU428和B2086，通过逐级增加巴龙霉素的浓度经过PCR鉴定获得稳定的阳性细胞株。通过对HA-HmgB3免疫定位发现，在营养生殖时期，HmgB3特异地定位于小核上。在饥饿时期，HmgB3则定位于小核的外周。在接合时期，HmgB3则特异地定位于有丝分裂和减数分裂的功能小核上，而在降解的小核中没有定位。过表达的HmgB3异常定位于新形成的大核上，进而导致有性生殖产生的子代的存活率仅达正常的50％左右。⑶截短型HmgB3在细胞内的定位为了研究HmgB3特异地定位机制，我们构建了不同的HmgB3的截短型表达载体以了解HmgB3的不同结构域在HmgB3定位中所起的作用。通过免疫荧光定位发现，双截短HMG-box和C端结构域的HMGB3△NC细胞株，HmgB3△NC弥散到胞质当中;C端结构域的去除并不会对HmgB3△C的定位产生影响。但是，一旦截了HMG-box结构域，HmgB3△N则完全弥散到胞质当中。这表明HMG-box结构域对HmgB3特异地定位于小核是必需的。