杆状病毒感染往往诱导昆虫细胞凋亡（apoptosis）。细胞凋亡作为一种宿主范围决定因子限制了杆状病毒的复制，从而影响了杆状病毒的杀虫范围，限制了杆状病毒杀虫剂在生物防治中大规模的应用；然而，在其长期的进化过程中，杆状病毒也获得了相应的抗细胞凋亡基因以阻止细胞凋亡的发生，从而使杆状病毒在宿主昆虫中能顺利复制。但是，杆状病毒具有种属特异性。根据目前已测序的杆状病毒全基因组序列结果分析，杆状病毒基因组中含有两类抗细胞凋亡的基因家族，即底物竞争性抑制家族（p35家族）和iap家族（inhibitors of apoptosis）。苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus，AcMNPV）是最早发现也是研究最详细的杆状病毒，尽管该病毒具有比较广泛的宿主域，但是AcMNPV的感染却诱导了SpLi—221细胞的凋亡，而斜纹夜蛾核多角体病毒（Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus，SpltNPV）却能在该细胞中顺利复制。对SpltNPV全基因组序列分析结果显示，SpltNPV基因组中含有p35家族的同源基因Splt—p49及Splt—iap4，为了研究这两个基因的抗细胞凋亡功能，本研究利用Bac—to—Bac重组技术，将SpltNPV基因组中抗细胞凋亡基因Splt—p49及Splt—iap4分别重组到缺失了抗细胞凋亡基因p35的重组AcMNPV Bacmid中，研究这几种重组病毒在AcMNPV的受纳宿主细胞Sf9及非受纳宿主细胞SpLi—221中病毒的复制情况。通过光学显微镜观察，凋亡染色实验及DNA阶梯状（ladder）条带实验，结果显示，Splt—p49能够替代Ac—p35在AcMNPV感染Sf9细胞中所起的抗细胞凋亡的作用，而Splt—iap4在病毒感染Sf9细胞中，既不能起替代Ac—35的抗细胞凋亡的作用，也不能延缓病毒诱导的细胞凋亡时序。 AcMNPV感染非受纳宿主细胞SpLi—221可诱导该细胞凋亡并抑制AcMNPV的复制。本实验室先前实验结果表明，AcMNPV及SpltNPV共感染SpLi—221可以抑制细胞凋亡，并挽救AcMNPV的复制。该结果暗示，在SpltNPV基因组中可能存在抑制AcMNPV诱导SpLi—221细胞凋亡的因子。但在本实验中，重组了SpltNPV抗细胞凋亡基因的几个重组AcMNPV在感染SpLi—221细胞后依然诱导了该细胞的凋亡，从而抑制了这几种重组病毒在非受纳宿主细胞SpLi—221中的病毒复制。推测Splt—p49在自身启动子或者AcMNPV ie1启动子的启动下不能表达足够抑制AcMNPV诱导的SpLi—221细胞凋亡所需要的P49蛋白量。所以我们利用SpltNPV ie1启动子及果蝇hsp70热激启动子超量表达Splt—iap4及Splt—p49基因，结果显示在果蝇hsp70热激启动子控制下超量表达Splt—p49基因能够抑制缺失p35的重组AcMNPV感染诱导的SpLi—221细胞的凋亡，但在感染的后期没有观测到病毒多角体的产生。而在SpltNPV ie1启动子控制下超量表达Splt—p49则不能抑制缺失p35的重组AcMNPV诱导的细胞凋亡，推测可能是在重组AcMNPV感染SpLi—221细胞这个系统中，SpltNPV ie1启动子没有果蝇hsp70热激启动子高效，从而无法在早期累积到足够抑制细胞凋亡所需要的有活性的P49蛋白。而Splt—iap4不管在SpltNPV ie1启动子还是果蝇中hsp70热激启动子控制下，都不能抑制SpLi—221细胞凋亡的发生，也不能延缓病毒诱导的细胞凋亡时序，这个结果也与我们实验室先前利用RNAi研究得到的结果一致：SpltNPV病毒感染受纳宿主细胞SpLi—221这个系统中Splt—IAP4不能阻止细胞凋亡的发生。TCID50检测表明，虽然超量表达了Splt—p49基因能够抑制重组AcMNPV诱导的SpLi—221细胞的凋亡，但是该重组病毒不能像SpltNPV感染SpLi—221细胞那样高效地产生子代病毒。Slot blotting结果显示，该重组病毒感染SpLi—221细胞后病毒DNA的复制水平也远远低于SpltNPV感染SpLi—221细胞中病毒DNA的复制水平。以上结果说明单独抗细胞凋亡基因的替换不能恢复AcMNPV在其非受纳宿主细胞SpLi—221中的复制，还存在其它抑制AcMNPV在其非受纳宿主细胞SpLi—221中复制的因子。 本研究为揭示SpltNPV p49及iap4基因与病毒诱导的细胞凋亡的关系提供了有力的证据。