MTS比色法与~3H-TdR掺入法检测肿瘤体外药物敏感性试验

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目的:确定MTS比色法与3H-TdR掺入法在进行实验比较时的最佳实验条件。比较MTS比色法与3H-TdR掺入法在药敏试验中的差异,从而明确用MTS比色法进行肿瘤药物敏感性检测的可行性程度及临床应用前景。方法:1.运用不同浓度的肝癌SMMC-7721细胞株进行3H-TdR掺入法药敏实验,找出3H-TdR掺入法药敏实验时的最适细胞浓度,并与MTS比色法的建议细胞浓度相比较,确定最适实验细胞浓度;2.用3H-TdR掺入法测定肝癌SMMC-7721细胞株在抗癌药物(5-FU)不同药物浓度作用下对细胞的抑制率,通过比较,确定最适实验药物浓度;3.最适细胞浓度的肝癌SMMC-7721细胞株在最适药物浓度抗癌药物(5-FU)作用下,用3H-TdR掺入法去测定, 3H-TdR掺入时间不同,比较其细胞抑制率差异程度,从而确定3H-TdR掺入最适时间;4.分别平行用3H-TdR掺入法与MTS比色法测定肝癌SMMC-7721细胞株与胃癌NKM-45细胞株对临床常用的10种抗癌药物阿霉素、5-氟脲嘧啶、顺铂、平阳霉素、异环磷酰胺、甲氨喋呤、足叶乙甙、盖诺、羟基喜树碱、丝裂霉素的敏感性,并比较出两种方法在肿瘤药敏试验中的相关性。结果:1.细胞浓度在1×103/孔-4×104/孔之间,3H-TdR掺入法检测出的CPM值与细胞数量呈正相关,r=0.9837(P<0.001)。用3H-TdR掺入法进行药敏实验得出的合适细胞浓度与MTS比色法中建议的细胞浓度比较,本作者取1×104/孔的细胞浓度为实验浓度;2.5-FU在 0.25×PPC药物浓度时,对浓度为1×104/孔肝癌SMMC-7721细胞株中度敏感,在0.5×PPC至5×PPC之间,对细胞均为高度敏感, 根据实验结果结合临床可行性,本作者取1×PPC的浓度作为试验药物浓度。3.在不同时间段(收集细胞前4h至24h)掺入3H-TdR,测量实验组(加药组)与对照组(未加药物组)的CPM值。对照组细胞CPM值的对数与3H-TdR掺入时间呈明显正相关,r=0.964(P<0.001)。根据实验结果结合工作便利原则,取收集细胞前8小时作为实验时3H-TdR掺入时间。4.取10种临<WP=4>床常用药物,平行用3H-TdR掺入法与MTS比色法测定它们对肝癌SMMC-7721细胞株与胃癌NKM-45细胞株的抑制率,两种方法测出的结果差异均无显著性(P>0.05)。肝癌SMMC-7721细胞株对顺铂、阿霉素、5-氟脲嘧啶、羧基喜树碱高度敏感;对甲氨喋呤、足叶乙甙、丝裂霉素、盖诺低度敏感;对平阳霉素、异环磷酰胺不敏感。胃癌NKM-45细胞株对盖诺高度敏感;对阿霉素、5-氟脲嘧啶、羟基喜树碱、丝裂霉素中度敏感;对足叶乙甙低度敏感;对顺铂、平阳霉素、异环磷酰胺、甲氨喋呤不敏感。结论: MTS比色法为一种新型的四氮唑盐类化合物,本课题通过将其与3H-TdR掺入法平行应用于肿瘤药物敏感性试验,发现其敏感性与经典的敏感检测方法3H-TdR掺入法相近,但其更具有操作简便、快速、无同位素污染等优点,在临床肿瘤药敏试验上有广阔的应用前景。
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