【摘 要】
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目的建立HEV IgG抗体、IgM、IgA间接ELISA检测方法。评估所建立的HEV IgG抗体、IgM、IgA间接ELISA检测方法,并进行评估,检测西双版纳自治州献血者戊型肝炎病毒感染情况,初步探讨HEV IgA抗体检测在HEV筛查中的作用。方法培养Tn-5细胞培养并对其进行血清驯化,感染重组HEV杆状病毒,提取纯化HEV VLP（virus-like particles,病毒样颗粒）,并用
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目的建立HEV IgG抗体、IgM、IgA间接ELISA检测方法。评估所建立的HEV IgG抗体、IgM、IgA间接ELISA检测方法,并进行评估,检测西双版纳自治州献血者戊型肝炎病毒感染情况,初步探讨HEV IgA抗体检测在HEV筛查中的作用。方法培养Tn-5细胞培养并对其进行血清驯化,感染重组HEV杆状病毒,提取纯化HEV VLP（virus-like particles,病毒样颗粒）,并用 SDS-PAGE 和 Western-blot 进行验证。收集云南地区2364份献血者全血样本,离心后放-80℃保存;运用文献报道的方法及万泰HEV抗体试剂盒联合检测1864份献血者样本,分别筛选出HEV IgG抗体、IgM、IgA阴性和阳性样本,用于后续ELISA检测方法建立。优化间接ELISA方法的各项反应条件,建立戊型肝炎病毒IgG、IgM及IgA抗体间接ELISA检测方法并进行性能评估。用本文建立的方法检测云南西双版纳自治州500份献血者血浆样本,统计HEV IgG抗体、HEV IgM抗体、HEV IgA抗体阳性率,计算HEV近期感染率（HEV IgM抗体/IgA任一阳性）和HEV血清流行率（HEV IgG抗体/IgM/IgA任一阳性）,初步评估HEV IgA抗体在HEV筛查中的作用。结果Tn-5细胞在无血清培养基中能良好繁殖,培养液中能检测出HEV VLP,经纯化后无杂蛋白,浓度为3.95mg/mL。建立的戊型肝炎病毒IgG及IgM抗体间接ELISA方法特异性和灵敏度均为100%,而戊型肝炎病毒IgA抗体间接ELISA方法特异性为95%,灵敏度为100%。在HEV IgG抗体、IgM和IgA检测时加入抗HCV、抗HIV、抗TP、抗HSV-2、HBsAb、HBeAb、HBcAb,脂血,溶血以及ALT后,样本阴阳性不被改变,且0D值变化无统计学差异（P>0.05）;批内及批间重复变异系数均<10%。本文建立的间接HEV抗体ELISA检测测得云南省西双版纳州献血人群HEV IgG抗体、IgM和IgA阳性率分别为 18%（90/500）、5.6%（28/500）和 2.6%（13/500）,HEV 近期感染率为 1.8%（9/500）,HEV血清流行率为19.8%（99/500）。如果仅以HEV IgM抗体单阳为HEV近期感染的判断标准,500例献血者里有7例近期感染,但如果联合HEV IgA抗体（IgG阴性且IgM/IgA任一阳性）作为HEV近期感染的判断标准,500例献血者里则有9例近期感染。在500例献血者样本中,有13例HEV IgA抗体阳性样本,其中2例HEV IgG抗体阴性,10例.HEV IgM抗体阴性,2例HEV IgG抗体和IgM双阴性。本文方法和万泰试剂盒对献血人群HEV IgG抗体检测结果的符合率为84.57%;对HEV IgM抗体检测结果符合率为96.28%,一致性均较好;本文方法和文献方法对献血人群HEV IgA抗体检测结果符合率为95.21%。结论本文使用昆虫杆状病毒表达系统表达HEV ORF2（Open Reading Frame 2,开放阅读框）区重组蛋白（aa112-608）作为包被抗原,建立了戊型肝炎病毒IgG、IgM及IgA抗体间接ELISA检测方法,可分别用于检测人HEV IgG抗体、人HEV IgM抗体和人HEV IgA抗体。建立的三种HEV抗体间接ELISA方法与其他病原体抗体阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性,能抵抗脂血、溶血、高浓度ALT对检测结果的干扰。云南省西双版纳自治州献血者HEV抗体流行率较高,部分献血者为近期感染,对输血安全可能构成威胁。HEV IgA抗体间接ELISA方法联合HEV IgM抗体检测,能提高HEV近期感染者检出率,对HEV感染的临床诊断和流行病学筛查与防治十分重要,但后续仍需收集HEV急性感染确诊者的样本,进行临床验证。
其他文献
[背景]液体治疗是临床治疗的重要组成部分,指南推荐脓毒症患者在应用大剂量晶体液复苏时联合白蛋白,有研究表明输注晶体液24小时内联合白蛋白治疗能增加脓毒症患者28d存活率。新鲜冰冻血浆（FFP）与白蛋白同属于天然胶体,研究发现相比白蛋白,FFP能通过修复内皮多糖包被来减少液体渗漏,这使得血浆在液体治疗中的地位逐渐上升,但输注血浆治疗能否同白蛋白一样改善患者预后仍不明确。本文旨在比较早期（48h内）联
研究目的了解我国早产的流行现状,分析孕妇的人口学特征、产科特征、心理特征、行为特征以及孕期增重对早产的影响,为早产的预防提供参考依据。研究方法研究对象来自中国孕产妇队列·协和项目（The Chinese Pregnant Women Cohort Study,CPWCS）,通过问卷调查和医院信息采集系统（HospitalInformation System,HIS）收集孕妇的人口学特征、产科特征、
以广西崇左薜荔果为原料，采用超声波辅助法提取薜荔果中的多酚，通过单因素试验和正交试验设计优化多酚的提取工艺，并以薜荔果多酚对DPPH·及·OH的清除效果评价其抗氧化活性。结果表明，薜荔果多酚最佳提取工艺条件为丙酮40%、料液比1∶35（g/mL）、提取温度70℃及提取时间150 min,在此条件下薜荔果多酚得率为4.59%。薜荔果多酚对DPPH·及·OH的清除能力与浓度呈正相关，当薜荔果多酚质量浓
背景:RhD阴性孕妇注射抗-D免疫球蛋白（anti-D immune globulin,RhIg）,能够抑制母体产生相应抗体,从而预防或减轻因母婴RhD血型不一致引起的胎儿新生儿溶血病（hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN）。目前RhIg主要通过主动免疫RhD阴性志愿者制备,但是在免疫过程中志愿者可能会发生血管外溶血反应,危害其健康。本课题
目的:恶性肿瘤是威胁人类健康的重大疾病。近年来,肿瘤免疫治疗已经成为肿瘤治疗领域的研究热点。阻断PD-1/PD-L1通路可减少免疫抑制并增强抗肿瘤效果。除抗体外,核酸适配体（aptamer）也能实现对PD-1/PD-L1通路的阻断。Aptamer是一种新型的配体分子,具有良好的生物相容性且易于合成。然而,aptamer在体内应用,还需要规避肾脏的清除及核酸酶的消化。迄今为止,DNA纳米结构用于提升
目的:本研究旨在研究影响成年Chiari畸形（Chiari malformation,CM）合并脊髓空洞症患者的术后脊髓空洞结局的因素。背景:脊髓空洞症是CM最常见的并发症之一。但是,减压手术后的远期脊髓空洞症预后相关因素并不明确。同样,尚没有通用的标准去定义脊髓空洞的形态学改善程度。方法:我们回顾性分析了 2013年至2018年在我院接受不同减压术式的CM患者的人口统计学和临床资料,同时收集了所
背景:宫颈癌（cervical cancer）是一种常见的妇科恶性肿瘤,在世界范围内常年位居女性恶性肿瘤发病率和死亡率的第四,严重威胁着女性的生命健康。宫颈癌是一种多因素诱导的疾病,其中高危型人乳头瘤病毒（High risk-Human papillomavirus,HR-HPV）的持续感染发挥着重要作用,除此之外,个体因素（生活习惯以及宿主的遗传因素等）在宫颈癌的发生中也发挥着重要作用。研究发现
研究目的 肺部疾病相关的肺动脉高压是一类肺动脉相关继发性疾病,表现为肺实质与肺间质发生不可逆的病变,而肺移植则是晚期患者治疗的主要方案。但是由于供体缺少,大多数患者无法得到配型符合的健康肺。人胚胎干细胞（hESCs）具有多能性,利用hESCs分化得到肺细胞有望成为可移植的种子细胞。DNA结合抑制因子-2（ID2）作为一种分化抑制因子,具有调控肺分化发育的功能,在器官发生及支气管分支等早期阶段有重要
背景:心力衰竭（简称“心衰”）,是全球重大的公共卫生问题。过去二十余年间,我国由心衰导致的死亡翻了一番,每年达100万,且仍在迅速增长。抑郁是心衰重要的危险因素和合并症,与患者生活质量差,临床治疗依从性降低相关,抑郁的变化情况可反映患者病情的进展。目前心衰患者抑郁状况与预后关联的研究多集中在欧美发达国家,且结论尚不一致。心衰住院患者院内到出院一个月的抑郁评分变化值与预后间的关联尚待研究,抑郁筛查工
阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）是常见的神经退行性疾病,其突出症状为进行性和不可逆的认知功能恶化,给人类和社会带来沉重的经济负担。目前由FDA批准的临床药物主要是单靶点药物（例如多奈哌齐）,它们可以显著延缓记忆力丧失和改善患者的认知功能,但却不能预防或完全治愈该病。基于AD复杂的发病机理和不完善的单靶点药物,越来越多的人开始关注多靶点药物的研发。天然产物及其类似物已成为