本研究旨在通过运用核糖体展示技术,在鼠源性单链抗体库中筛选出抗ICOSL的特异性抗体,以期在减轻器官移植的排异反应方面能有更广阔的应用。第一,通过RT-PCR从人B淋巴瘤细胞Daudi的总RNA中扩增出ICOSL胞外区基因,并将此基因插入到原核表达载体pET28a中进行表达。第二,以表达纯化的ICOSL蛋白为抗原免疫Balb/c、鼠,每两周免疫一次,共免疫4次。免疫后,取小鼠脾脏提取总RNA,通过RT-PCR扩增小鼠的重链可变区和Linker (VH-linker)序列,以及轻链可变区和Linker (Vκ-linker)序列。经重组PCR将两段基因连接起来,将VH/κ与pMD19-T载体链接产物转化E. coli DH5a, PCR鉴定并测序。第三,通过核糖体展示技术,使抗ICOSL单链抗体库经过体外翻译,形成“单链抗体—核糖体—mRNA"三元复合物。并用BAFF-His蛋白进行负筛,再将ICOSL蛋白做抗原,进行3轮正筛,从而获得抗ICOSL的特异性单链抗体基因序列,并将此序列嵌入到PET43.1a表达载体中进行蛋白表达。最后,对表达出来的蛋白进行间接ELISA检测,从而筛选出高效表达目的蛋白的克隆菌株。将表达产物经镍柱纯化得到抗ICOSL单链抗体,并经Western blot检测其特异性。本研究以重组ICOSL胞外区蛋白为抗原构建抗ICOSL单链抗体库,并通过核糖体展示筛选获得单链抗体,经过特异性与活性的检测,我们成功的筛选得到了对ICOSL具有高亲和的单链抗体。为抗ICOSL单链抗体的人源化改造,并利用其治疗器官移植引起的急慢性排异反应奠定基础。