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植物内生真菌分布广泛、种类多样,几乎存在于所有已研究过的植物中,不仅具有产生与宿主植物相同或相似的活性代谢产物的能力,而且还能产生与宿主植物不同的活性成分,从中发现结构新颖的化合物,为天然生物活性物质的研究提供丰富的潜在资源。
滇牡丹(Paeoniadelavayi)根皮是著名传统中药牡丹皮的重要原料之一,已有2000多年的药用历史,可用作镇痉药,有清热凉血、活血行瘀的疗效。其性微寒,味苦、辛,具有消炎、抗过敏、抗病毒、提高免疫力、治疗多种妇科疾病等功效,对治腹痛、中风等症有显著疗效。本论文对滇牡丹植物的须根、块根、茎和叶不同部位开展了内生真菌的分离、鉴定和种类组成分析,共分离获得滇牡丹植物内生真菌83株,经初步的形态鉴定分属于9个属和无孢类群(Agonomycetales),其中以无孢类群为优势种群,占菌株总数的53%,其次是毛壳菌属(Chaetomium),占总菌株的16%。不同培养基对分离得到的内生真菌种类和数量有所影响,分离菌株数量最多的为PDA培养基,其次为麦芽汁培养基和查氏培养基,水琼脂培养基分离数量最少。内生真菌在滇牡丹不同部位中的分布也明显不同,从滇牡丹植物块根和茎部分离到的菌株数量明显多于须根和叶。
对上述所分离得到的83株内生真菌进行抗菌活性研究,结果表明滇牡丹植物内生真菌中广泛分布着抗菌活性菌株,63株内生真菌对11株病原指示菌株中的一株或多株有抑制生长作用,其中22株菌对五种或五种以上的指示菌有抑制生长作用,占有抑菌活性菌株的35%,抗菌作用较广。
根据抗菌活性筛选和TLC化学筛选的结果,对其中两株活性菌株PS11-1和MR39-1进行了分类鉴定。通过对其菌落形态、显微形态特征的观察以及18SrDNA序列测定和分析,确定菌株PS11-1为果生炭角菌(Xylariacarpophila),菌株M39-1为高大毛壳(Chaetomiumelatum)。
对菌株PS11-1和MR39-1的发酵产物进行了化学成分的研究。从菌株PS11-1的发酵产物中分离得到6个单体化合物,经波谱数据分析,确定其中三个为新化合物,分别命名为xylaroxideA、xylaroxideB、xylaroxideC,均为多氧环己烯类新化合物,该类化合物通过聚酮途径产生,经环化和氧化形成多氧环己烯的结构单元,为首次从炭角菌属真菌中分离获得。其余3个化合物分别鉴定为啤酒甾醇(cerevisterol,4)、1-(4-Hydroxyphenyl)-1,2-ethanediol(5)和脑苷脂C(cerebrosideC,6)。从菌株MR39-1的发酵产物中分离得到2个单体化合物,分别鉴定为苔黑酚(orcinol)和苔色酸(gyrophoricacid)。对部分化合物进行了抗真菌活性试验,其中xylaroxideB在100ug的测定质量下,对皮炎单孢枝霉(Hormodendrumdermatitidis)和玉蜀黍长蠕孢(Helminthosporiummaydis)的抑菌圈分别为7mm和8mm,xylaroxideA对白色念珠菌(Candidaalbicans)、紧密单孢枝霉(Hormodendrumcompactum)、黑曲霉(Aspergillusniger)、岛青霉(Penicilliumislandicum)、灰葡萄孢(Botrytiscinerea)的最小抑菌质量分别为250ug、1000ug、62.5ug、500ug、125ug。