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鱼藤酮(Rotenone)是从鱼藤属等植物中提取出来的杀虫物质，其活性高，杀虫谱广，是害虫综合防治的理想杀虫药剂。农药的广泛应用，引起的环境污染、残留问题日趋严重，农药在食品和环境中的残留问题越来越引人关注，对农产品的农药残留量以及检测仪器灵敏度也提出了更高的要求。有必要对过去曾经认为是安全的药剂进行农药残留检测和环境毒理的研究。本论文对生物农药鱼藤酮进行半抗原改造，制备人工抗原，通过免疫动物制备出了多克隆抗体，以此建立起一套快速、准确的ELISA检测技术。
探讨了生物农药鱼藤酮的免疫化学特性，从鱼藤酮分子结构中的羰基位点出发，通过与水合肼反应合成鱼藤酮腙(RH)，再用琥珀酸酐法将RH继续衍生，合成半抗原鱼藤酮琥珀酸半酯(RH-HS)。半抗原RH分别用戊二醛法、重氮法与载体蛋白BSA、OVA偶联合成人工抗原：RH-BSA(GA)、RH-OVA(GA)；RH-BSA(DT)、RH-OVA(DT)。半抗原RH-HS分别用碳化二亚胺法、活酯法、混合酸酐法与载体蛋白偶联制备人工抗原：RH-HS-BSA(EDC)、RH-HS-OVA(EDC)；RH-HS-BSA(AE)、RH-HS-OVA(MAM)。对各偶联物进行紫外光谱扫描，并计算出半抗原与载体蛋白的结合比分别为：16.74：1、7.38：1：29.03：1、18.01：1：23.62：1、8.74：1；25.53：1、18.31：1。经免疫Balb/c鼠得到四种相应抗鱼藤酮多克隆抗体：抗RH(GA，Ab1)、抗RH(DT，Ab2)、抗RH-HS(EDC，Ab3)和抗RH-HS(AE，Ab4)，采用辛酸．硫酸铵盐析法纯化抗体并制成冻干粉，测定其效价分别为5.12×104，2.05×105，4.10×105和8.29x105。
通过间接竞争酶联免疫分析(ELISA)法，对固相载体、包被缓冲液，缓冲液pH值、离子强度、洗涤液量、酶标二抗、反应时间和温度、有机溶剂和贮存条件等因素的进行筛选，优化了ELISA的方法和条件。结果表明，用德国产Greiner Bio-one酶标板，0.05mol/L，pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释包被原，在37℃下包被2h为最佳包被条件。采用优化后的分析条件，进行了抗体亲和性和特异性的研究。结果显示，Ab1和Ab2对鱼藤酮抑制不明显，不适于ELISA分析，Ab3和Ab4均表现出良好的亲和性和特异性。对于抗体Ab3，当鱼藤酮在0.1～5μg/m浓度范围时，其与抑制率有较好线性关系，线性回归方程为y=30.5281n(x)+45.084(r=0.9929)，最低检测限IC20为0.440μg/mL;对于抗体Ab4，当鱼藤酮在0.1～10μg/mL浓度范围内，其与抑制率有较好线性关系，回归方程为y=23.845ln(x)+39.732(r=0.9878)，最低检测限IC20为0.437μg/mL。Ab3和Ab4对吡蚜酮、克百威的交叉反应率均小于1.1％。二种抗体与鱼藤酮肟、去甲基鱼藤酮、12-羟基鱼藤酮、异鱼藤酮4种鱼藤酮类似物的交叉反应率都较高，均在28％以上。因此，本抗体可以对鱼藤酮及其类似物进行测定。用Ab3和Ab4抗体建立的ELISA分析方法，对水、土壤和甘蓝做添加回收试验，并与高效液相色谱分析法进行比较。以Ab3和相应的包被原建立间接竞争ELISA法测定在水中鱼藤酮的添加回收率为84.560％～93.800％，变异系数为6.828％～9.861％，土壤中添加回收率为85.200％～92.360％，变异系数为9.276％～10.534％，甘蓝上添加回收率为86.800％～97.620％，变异系数为7.972％～11.121％；以Ab4和相应的包被原建立的间接竞争ELISA法测定在水中的添加回收率为82.300％～92.600％，变异系数为7.493％～10.345％，土壤中添加回收率为91.600％～94.200％，变异系数为6.443％～8.448％，甘蓝上添加回收率为92.400％～95.100％，变异系数为10.970％～13.793％，符合鱼藤酮农药残留检测要求。这与传统的HPLC检测手段相比，在检测线性范围和灵敏度方面，两者差异不明显，但在样品前处理方面，则显示出ELISA快速、简单、有效的优点。