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[目的]本论文分为两部分: 第一部分:利用不同细胞因子组合体外扩增脐血单个核细胞(mononuclear cells,MNC)探讨MNC体外增殖作用以及理想的细胞因子组合。 第二部分:通过MNC移植BABL/c小鼠大剂量放疗模型进行体内重建造血及植入的研究,为脐血及其MNC在妇科恶性肿瘤中的应用打下基础。 [方法]第一部分:对同一份脐血采用两种细胞因子组合(TPO+FL+IL-6、TPO+FL+IL-6+IL-3)体外短期扩增9天,采用流式细胞技术检测MNC及CD34~+细胞数量变化。 第二部分:把经亚致死量照射后建立的BABL/c小鼠大剂量放疗模型随机分为4组,分别由尾静脉注入脐血、新鲜及扩增后的MNC悬液和生理盐水,同时设空白对照组。比较各组小鼠的存活率及造血恢复情况,并应用多聚酶链式反应(PCR)和免疫组化方法观察小鼠体内人源细胞植入情况。按照扩增时细胞因子组合的不同,将输注扩增MNC组的小鼠分为两个亚组,比较两个亚组之间上述指标的差别。 [结果]第一部分:两种细胞因子组合均对脐血MNC及CD34~+细胞有扩增作用,含IL-3的组合对脐血的扩增效果(8.96±0.52倍)优于不含IL-3组(6.28±0.16倍)。两组比较有显著性差异(P<0.01)。 第二部分:各组小鼠均存活至实验结束;实验组造血恢复情况优于对照组(P<0.05),脐血输注短期内外周血象恢复较MNC输注快;扩增前后MNC均可在BABL/c小鼠体内植入,形成供-受嵌合体并重建造血功能,植入率无显著性差异(P>0.05);输注扩增MNC的两个亚组各项指标无显著性差异(P>0.05)。 [结论]第一部分:应用细胞因子组合FL+TPO+IL-6能够有效扩增脐血MNC及CD34~+细胞数,使单份脐血达到成人移植所需的细胞数,加入IL-3可以大大增强这种扩增效果。 第二部分:体外扩增后的人脐血MNC仍保持其重建造血功能及植入潜能,IL-3加入细胞因子组合在不影响其体内重建造血及植入能力的同时增加了脐血MNC扩增效应。脐血MNC输注可以和脐血输注相结合来解决短期造血恢复延迟的问题。 总之,体外扩增可以有效解决单份脐血MNC含量少的问题,在其应用的细胞因子组合中IL-3具有积极意义,小鼠体内实验的结果为脐血用于妇科恶性肿瘤大剂量放化疗支持提供了依据。