七氟烷对幼龄大鼠学习记忆的影响及纹状体wnt信号通路在其中的作用

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目的:七氟烷是临床上小儿麻醉最常使用的吸入麻醉药,其潜在神经毒性可能是导致术后认知功能障碍的原因而受到广泛关注。近年来研究发现纹状体参与了术后认知功能障碍,影响学习记忆功能。Wnt/β-catenin信号通路参与了细胞增殖、胚胎发育、存活和凋亡等多种细胞功能,激活Wnt/β-catenin信号通路,增加其β-catenin蛋白表达,能促进神经元细胞再生。七氟烷麻醉对幼龄大鼠学习记忆有无明显影响,该影响是否通过七氟烷引起纹状体改变以及Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用,目前还不清楚。因此本研究拟通过观察七氟烷对幼龄大鼠学习记忆的影响,并探讨其机制是否与增加纹状体神经元凋亡及影响β-catenin蛋白表达有关。方法:7日龄(P7)SD大鼠64只(10g~15g),根据随机数字法分为:空白对照组(C)组及七氟烷组(S)组,每组32只。C组大鼠单纯吸入60%氧气3h,S组大鼠吸入3%七氟烷与60%氧气混合气体3h。24h后即大鼠P8天时(P8)随机抽取两组中各8只大鼠行HE、TUNEL染色,测定其纹状体神经元密度和神经元凋亡指数。同时两组再随机抽取8只大鼠测定纹状体β-catenin蛋白表达,两组各剩余16只大鼠三周后即P28天时(P28)行为期5天的水迷宫实验进行学习记忆能力测试,记录大鼠逃避潜伏期时间、游泳速度、原平台穿越次数。学习记忆能力测定后24h即P33天时(P33)两组再随机抽取8只大鼠分别行HE、TUNEL染色测定其纹状体神经元密度及神经元凋亡指数,剩余8只大鼠行Western实验测定纹状体β-catenin蛋白表达情况。结果:1.神经元密度:P8天时纹状体神经元密度C组大鼠(94±4.79 n/hp多于S组大鼠(79.8±6.57n/hp),有统计学意义(P=0.003<0.01);P33天时纹状体神经元密度C组大鼠(87.4±3.84n/hp)与S组大鼠(88.8±9.25n/hp)比较,无统计学意义(P=0.736>0.05);C组大鼠P8天时与P33天时神经元密度比较,无统计学意义(P=0.126>0.05)。S组大鼠纹状体神经元密度P33天时比P8天时增多,有统计学意义(P=0.042<0.05)。2.神经元凋亡:P8天时纹状体神经元凋亡指数S组大鼠(0.396±0.099)多于C组(0.09±0.029),有统计学意义(P=0.000<0.01);P33天时纹状体神经元凋亡指数C组大鼠(0.088±0.025)与S组大鼠(0.1±0.0255)比较,无统计学意义(P=0.734>0.05);C组大鼠P8天时与P33天时神经元凋亡比较,无统计学意义(P=0.955>0.05);S组大鼠纹状体神经元凋亡P33天时比P8天时减少,有统计学意义(P=0.000<0.01)。3.Wnt/β-catenin蛋白表达水平:P8天时大鼠纹状体区Wnt/β-catenin蛋白表达S组比C组减少,有统计学意义(P=0.034<0.05);P33天纹状体区Wnt/β-catenin蛋白表达S组与C组比较,无统计学意义(P=0.848>0.05)。4.Morris水迷宫测试学习记忆能力:(1)游泳速度比较:S组大鼠与C组大鼠比较,无统计学意义(P=0.618>0.05)。(2)逃避潜伏期比较:在水迷宫测试第1d(P28天)时,C组大鼠与S组大鼠比较,逃避潜伏期时间无统计学意义(P=0.658>0.05);在第2d(P29天)、第4d(P31天)时,S组逃避潜伏期时间较C组延长,有统计学意义(P=0.000<0.01);(3)在第5d(P32天)原平台区域进入次数比较:S组大鼠进入平台穿越次数较C组大鼠减少,有统计学意义(P=0.045<0.05)。5.相关分析:P8天时β-catenin蛋白表达与神经元密度成正相关(r=0.5451,P=0.000<0.01);P8天时β-catenin蛋白表达与神经元凋亡成负相关(r=﹣0.7518,P=0.000<0.01)。结论:1.7日龄大鼠吸入3%七氟烷3h,3周后出现学习记忆能力障碍。2.7日龄大鼠吸入3%七氟烷3h可致幼龄大鼠早期神经损伤:纹状体神经元密度减少、Wnt/β-catenin蛋白表达减少、神经元凋亡增多。3.吸入七氟烷导致幼龄大鼠学习记忆能力障碍可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路,导致纹状体神经元凋亡增加及数量减少有关。
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