鸡贫血病毒（chicken anemia virus，CAV）是一种类型独特的环状单链（负链）DNA病毒。研究证实VP3蛋白(Apoptin,亦称凋亡素)是CAV的功能蛋白，可广泛诱导肿瘤细胞凋亡，而且仅诱导具有致瘤表型细胞或转化表型细胞的凋亡，而对正常二倍体细胞无凋亡效应、无细胞毒性。并且，VP3诱导凋亡途径为P53非依赖型，不受Bcl-2高表达的抑制。传统化疗药物常常由于P53突变导致肿瘤细胞对化疗药物敏感性降低，因此，VP3蛋白是一种更具应用前景的抗肿瘤生物制剂。细胞透膜肽（Cell-Penetrating Peptide，CPP）是一类能携带生物大分子进入细胞的短肽，它不依赖经典的细胞内吞。大量的研究表明细胞透膜肽具有强大的运载潜能，不仅可以携带多肽、GFP、RNaseA 而且可以携带DNA、反义核酸、有机分子、脂质体等。与其他的蛋白质形成的融合蛋白也能透过细胞膜，并发挥这些蛋白质的生物学功能。因此，本研究正是将两者结合在一起，为肿瘤等疾病的治疗提供新思路。本课题组在前期研究中已证明PTD4能通过生物合成而实现其融合蛋白PTD4-GFP-VP3对体外培养的多种细胞的透膜作用。 本研究分别从体内外实验观察PTD4-VP3融合蛋白诱导宫颈癌细胞凋亡的效应。利用PTD4-VP3融合蛋白的原核表达载体，经IPTG诱导融合蛋白表达，镍金属鳌合层析柱纯化获得融合蛋白。利用流式细胞仪检测融合蛋白体外诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡效率。在此基础上,建立人宫颈癌Hela细胞异种移植裸鼠模型，将融合蛋白PTD4-VP3，涂抹在宫颈癌皮下移植瘤的皮肤表面,治疗7天后，比较皮下移植瘤大小并利用TUNEL法观察PTD4-VP3融合蛋白诱导宫颈癌细胞的凋亡效应及对正常组织的毒性。 结果显示：随着融合蛋白PTD4-VP3孵育Hela细胞时间的延长，细胞总凋亡率升高，在孵育48小时后细胞总凋亡率最高，达59.73％；裸鼠宫颈癌皮下移植瘤生长曲线显示，治疗组和对照组在涂抹前瘤块体积不存在明显差异（P=0.9533，P>0.05），经融合蛋白涂抹治疗7天后，治疗组裸鼠的瘤块生长速度低于对照组瘤块，治疗结束时两组间瘤块体积有差异，具有统计学意义（P=0.0115，P<0.05）。根据第7天测量的两组瘤块的体积，经计算肿瘤生长抑制率为66.36％。；TUNEL-DAB染色法检测到治疗组宫颈癌细胞的大范围凋亡，对照组宫颈癌细胞少见凋亡；HE染色未见治疗组裸鼠主要脏器发生凋亡。 结论：PTD4－VP3融合蛋白可以透过皮肤，并通过特异性诱导肿瘤细胞凋亡的方式抑制肿瘤生长，为进一步VP3治疗肿瘤的研究奠定了基础。