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斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)是我国重要的海水经济养殖鱼类之一,然而其养殖产量一直受到病害的制约。β-葡聚糖作为一种新型的天然免疫增强剂,在水产养殖业中具有良好的应用前景。本文开展了β-葡聚糖诱导斜带石斑鱼转录组测序分析及不同浓度β-葡聚糖诱导下免疫相关基因的表达分析,探究了β-葡聚糖对斜带石斑鱼免疫相关基因表达的影响。通过腹腔注射0.2 m Lβ-葡聚糖(浓度0.05 g/m L)刺激斜带石斑鱼,分别于6 h、72 h分别取胸腺、脾脏、头肾和血液淋巴细胞四个组织进行转录组测序。结果一共组装了123677条unigene,平均长度是1711.30 bp。通过Blast比对数据库进行功能注释,一共注释了96355条unigene。六大数据库注释得到的unigene数量分别为:91955条(Nt)、66089条(Nr)、14126条(GO)、24018条(COG)、9673条(KEGG)和54148条(Swiss Prot)。数据结果表明组装效果良好,据此进行转录组分析得出:(1)对差异表达基因进行分析,筛选出6类免疫相关的显著性差异基因74个,涉及抗原加工呈递、细胞粘附分子、补体系统、细胞因子、模式识别受体和吞噬作用。(2)对差异基因进行GO富集分析,筛选出免疫相关条目7条,包括免疫应答、B细胞受体信号通路、趋化因子受体活性、白细胞趋化性、趋化因子调节信号通路、白细胞介素-1受体绑定和溶酶体组份。(3)对差异基因进行KEGG通路富集分析,共筛选出19类免疫相关通路。其中Tolllike受体信号通路和RIG-I-like受体信号通路在血液淋巴细胞、脾脏、头肾和胸腺四个免疫组织均显著富集;T细胞受体信号通路、NOD-like受体信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性通路、造血细胞谱系通路在血液淋巴细胞、脾脏和头肾三个组织中均显著富集;B细胞受体信号通路和肠道Ig产生的免疫网络通路在血液淋巴细胞和头肾组织中均显著富集。(4)随机挑选7个显著性差异表达的免疫相关基因进行q RT-PCR验证,验证结果与测序的变化趋势一致,说明转录组测序结果的可靠性较高。进一步研究在不同浓度的β-葡聚糖诱导下,斜带石斑鱼免疫相关基因时序表达情况。实验设置5个实验组,分别对斜带石斑鱼注射0.2 m L的b-葡聚糖(浓度为0.015 g/m L、0.03 g/m L、0.06g/m L、0.12g/m L、0.15 g/m L),1个对照组注射等量的PBS缓冲液。在注射后的1d、2d、3d、4d、5d、6d和7d分别采集胸腺、脾脏、头肾和血液淋巴细胞四个组织样本。最后通过Real-Time PCR技术检测斜带石斑鱼的IL-1β、TLR13、IFNα、MHC-I、TNFα、C3-1和CD2基因的相对表达量。结果显示:(1)IL-1β、TNFα和TLR13基因的相对表达量受到β-葡聚糖注射剂量的影响:三者都是在注射浓度为0.06 g/m L时,基因整体表达量达到峰值;浓度低于0.06g/m L时,表达量随着浓度的升高而升高;当浓度高于0.12g/m L时,基因的表达量随着浓度升高而下降。(2)MHC-I基因和C3-1基因的表达量受到β-葡聚糖注射剂量的影响:注射浓度为0.06 g/m L时,二者整体相对表达量达到峰值;浓度大于0.12 g/m L时,基因的表达量一直维持在相对较高水平,但并不随β-葡聚糖浓度的增加而升高。(3)IFNα基因表达量受到β-葡聚糖注射剂量的影响:注射浓度为0.12g/m L时,四个组织中的相对表达量达到最高;浓度低于0.12 g/m L时其表达量随着浓度的升高而升高。(4)CD2基因的表达与β-葡聚糖刺激的浓度和刺激后的时间都有一定的关系:当浓度大于0.12g/m L时,基因的相对表达量从5d以后显著提高。本论文研究工作为β-葡聚糖调节鱼类免疫系统的作用机制提供参考。