粗提和纯化的HPV16L1重组蛋白为抗原的ELISA实验比较

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目的:评价真核及原核细胞表达的人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)16L1粗提蛋白代替纯化的HPV16L1蛋白做为酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)抗原的可行性,为降低检测HPV感染的ELISA试剂盒的成本提供实验依据。 方法:(1)诱导重组大肠杆菌pQE31-HPV16L1/M15,使其表达HPV16L1重组蛋白,纯化表达的蛋白;(2)用重组杆状病毒rBacHPV16L1感染Sf9昆虫细胞,培养并收集表达HPV16LI的昆虫细胞。(3)分别采用纯化的HPV16L1蛋白、表达HPV16L1的大肠杆菌破碎物及表达HPV16L1的昆虫细胞破碎物作为包被抗原,以HPV16L1单克隆抗体为第一抗体,进行ELISA反应,并进行结果比较。 结果:三种包被抗原分别与同一稀释度下单抗反应时OD值相似;在与一系列稀释度下的单抗反应时,三种不同抗原可以得出非常相近的OD值变化趋势。 结论:用表达HPV16L1的大肠杆菌破碎物或表达HPV16L1的昆虫细胞破碎物均可以替代纯化的HPV16L1蛋白作为包被抗原进行ELISA试验。这为进一步进行HPV血清学检测提供了实验依据。
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