近年来,藻类作为一种新的生物反应器得到重视,相对于已有的大肠杆菌、酵母、转基因动植物系统而言,具有生长迅速、培养简单、易于遗传操作、成本低廉等特点,受到了人们的青睐。其中盐藻是迄今已知最耐盐的单细胞真核绿藻,可在0.05-5.5M NaCl中生长,是适合大规模开放式培养的理想微藻。　　 目前,模式生物衣藻的转基因研究已趋于成熟,作为衣藻的近缘藻,盐藻的转基因研究也在逐步进展,已有多种蛋白在盐藻核系统中表达。随着核转化系统研究不断深入,也发现了一些至今尚未解决的难题:表达量低、基因组大且背景复杂、外源基因转入后易出现失活、沉默和位置效应、在其内表达原核基因必先经修饰改造、环境安全问题等易发生。叶绿体转化系统因其定点整合,可人为控制其插入位点,从而很好地解决了核转化后“基因失活”、“位置效应”等问题。而叶绿体DNA分子的多拷贝及多顺反子的表达形式,可使外源基因由共同的启动子控制,不仅操作简便而且避免了“共沉默”现象,还对外源性表达产物的积累拥有较高的耐受能力,为外源基因的在其系统的高效表达提供了保障。其母系遗传的特点也使其具有较高的生物安全性,因此叶绿体转化成为盐藻转化的一个重要方向。叶绿体转化的关键是构建能够定点整合的表达载体,必须有适宜的同源序列和插入位点。杜氏盐藻CCAP19/18的叶绿体基因全序列已测定完毕(Genbank号:GQ250046.1,全长269044bp),为建立盐藻的叶绿体转化系统提供了极大的便利。本文选取ch1N基因作为同源片段,将外源基因插入其内。ch1N基因与ch1B、ch1L一起编码光非依赖的原叶绿素酸酯还原酶,任一破坏均可阻断叶绿素在黑暗条件的合成,但藻类可通过光依赖的原叶绿素酸酯还原酶合成叶绿素,不影响其生存。　　 本文通过密度梯度离心法分离杜氏盐藻完整叶绿体,提取叶绿体DNA,作为模板,设计引物采用PCR法扩增获得了ch1N目的片段1622bp。以ch1N基因片段为同源片段,以aptA基因的启动子和rbcL基因的终止子为调控元件,以氯霉素乙酰转移酶基因(cat)为筛选标记,构建了杜氏盐藻叶绿体表达载体pch1N1622-CAT,在25μF、0.8 kV条件下通过电击法转入野生型杜氏盐藻中。为实现叶绿体的稳定转化,必须有适宜的选择压力,有效地杀死未转入外源基因和未有效整合的藻株,并使转入整合的外源基因顺利地实现同质化。本实验针对杜氏盐藻CCAP19/18,对各类常用抗生素的敏感性进行了筛选,并对其敏感的氯霉素进行了粗筛和细选,最终确定CCAP19/18叶绿体转化的氯霉素选择浓度为300μg/ml。结果表明：通过电击法将载体pUC-ch1N1622-CAT。转入CCAP19/18叶绿体中,在300μg/ml的选择压力下,野生藻在7-8天死亡,而转化藻则继续生长,PCR扩增鉴定表明CAT基因已整合入CCAP19/18叶绿体基因组中。