论文部分内容阅读
目的:本项目研究不同剂量Nutlin-3a对内源性p73α表达及功能的影响，探讨由此产生的对结肠癌细胞老化和静止的作用及其作用机制，为Nutlin-3a用于p53突变及p53缺失的结肠癌的治疗、减少此癌复发的可能性提供实验依据。 方法:人体结肠癌细胞株Caco-2(p53基因突变，含野生型p73α基因)，用10％胎牛血清DMEM培养基培养于5％CO2、37℃的潮湿环境中24h。用含0μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM、60μM及80μM的Nutlin-3a培养液培养Caco-2细胞72h后，用MTT法检测Nutlin-3a对Caco-2细胞的抑制作用;WesternBlot检测p73α蛋白在Caco-2细胞中的表达;SA-β-gal染色标识出老化的Caco-2细胞;细胞集落形成分析检测Caco-2细胞在Nutlin-3a撤药后是否重新增殖。寻找一个浓度范围的Nutlin-3a所诱导的p73α能引起癌细胞死亡（凋亡及有丝分裂死亡）及老化，但不引起癌细胞静止，而使肿瘤在化疗药物撤除后复发的可能性减少，并探索Nutlin-3a引起上述结果的作用机制。 结果:Nutlin-3a能抑制Caco-2细胞的生长;Nutlin-3a可以上调p73α蛋白在Caco-2细胞中的表达，且有浓度依赖效应;Nutlin-3a引起结肠癌老化但不引起其静止的最佳浓度范围是5-10μM。 结论:Nutlin-3a可以使P73α蛋白在Caco-2细胞中的表达加强，且有浓度依赖效应。当Nutlin-3a的浓度为5-10μM时，Nutlin-3a对结肠癌细胞Caco-2的抗肿瘤效应最好。