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目的:通过检测高糖环境下前列腺癌细胞的增殖或凋亡情况及自噬水平,并利用自噬阻断剂3-MA作用细胞以观察细胞增殖或凋亡的变化,探讨自噬在高糖诱导前列腺癌细胞增殖中的可能作用机制。方法:1.将前列腺癌细胞株LNCap细胞进行稳定传代培养,运用CCK8法检测LNCap前列腺癌细胞在不同浓度高糖(正常糖5mmol/L、中度糖10mmol/L、高度糖30mmol/L)诱导下的不同时间点(24h、48h、72h)的细胞增殖状况,并用DAPI染核法分析细胞凋亡情况,最后采用Western blot测细胞抗凋亡指标Bcl-2蛋白表达情况。2.MDC、AO染色方法检测LNCap前列腺癌细胞株在不同浓度高糖(正常糖5mmol/L、中度糖10mmol/L、高度糖30mmol/L)诱导下的不同时间点(24h、48h、72h)自噬表达情况;并且用Western blot测细胞自噬指标LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达;最后用GFP-LC3质粒转染LNCap细胞验证不同浓度及时间点高糖诱导下其自噬的表达情况。3.选取LNCap细胞增殖凋亡及自噬表达变化大的第72小时高度糖30mmol/L作为实验对象。在高糖环境培养的前列腺癌细胞经自噬抑制剂3-MA(终浓度为10mmol/l)作用后,利用CCK8法检测细胞的活力及DAPI染核分析细胞凋亡情况,然后通过流式细胞学技术对细胞活性氧检测(ROS测定)和荧光显微技术对细胞内线粒体电位进行检测(JC-1探针),研究高糖培养环境下阻断自噬后对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机理。结果:1.CCK8法检测细胞生长曲线结果显示前列腺癌LNCap细胞在高度糖培养条件下的癌细胞活力升高;DAPI染核结果显示高度糖环境培养下的前列腺癌细胞凋亡率能够保持较低水平;Western blot测细胞抗凋亡指标Bcl-2蛋白表达情况可见随着培养基糖浓度增加及培养时间延长,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量是显著升高的,尤其是72小时的高糖组抗凋亡Bcl-2蛋白表达最多,这印证了前两种方法检测的结果。2.MDC、AO染色检测前列腺癌LNCap细胞内自噬结果显示在高糖培养条件下自噬有显著增高;Western blot检测结果同样显示在高糖培养条件下LNCap细胞自噬相关蛋白LC3-II/I比值显著上调。以GFP-LC3转染前列腺癌细胞显示的免疫自噬荧光点统计结果同样能验证上述结果。3.CCK8法检测前列腺细胞的活力发现LNCap细胞高糖实验组加入自噬抑制剂3-MA后细胞活力明显低于对照组;DAPI染色实验显示高糖自噬抑制剂组的LNCap细胞凋亡率明显升高,组间差异具有统计学意义(P<0.05);通过对LNCap细胞活性氧检测(ROS测定)进行流式细胞学检测显示高糖培养条件下LNCap细胞内的氧自由基显著升高;再通过检测前列腺癌细胞内线粒体电位检测(JC-1探针)发现LNCap细胞在高糖培养环境下细胞经3-MA作用后的线粒体出现显著电位下降。结论:高糖环境会促进LNCap细胞生长,并刺激LNCap细胞内自噬明显升高。高糖刺激前列腺癌细胞自噬增加的可能机制是高糖在癌细胞内线粒体代谢中产生过多具有破坏性的氧自由基,诱发癌细胞内保护性自噬增加。自噬抑制剂3-MA的应用可破坏自噬保护机制,最终导致高糖环境下LNCap细胞的凋亡率升高,细胞死亡。