【摘 要】
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作为自然防御体系的重要组成部分,蛋白酶抑制剂是抗虫基因工程的重要候选基因。杨树是木本模式植物,作为多年生植物,它在进化过程中形成了非常完善和有效的防御体系。杨树中有一
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作为自然防御体系的重要组成部分,蛋白酶抑制剂是抗虫基因工程的重要候选基因。杨树是木本模式植物,作为多年生植物,它在进化过程中形成了非常完善和有效的防御体系。杨树中有一系列能够被机械损伤或者虫害诱导的基因,它们被认为是潜在的具有抗虫能力的基因。我们选择了四个创伤可诱导基因(两个基因来自KTI家族,其中PtdKTI5来自杂交杨Populus trichocarpa×P. deltoides,PtKTI2来自白杨Populus tremuloides Michx.,胁迫蛋白PtdPOP3和能够在茎和叶中被诱导表达的PtdWIN4来自杂交杨Populus trichocarpa×P. deltoides)检测其抗虫方面的能力。我们使用花絮浸泡法使四种基因由CaMV35S启动子控制,分别在拟南芥过量表达。目的基因的整合通过基因组PCR验证,转录水平通过qRT-PCR技术分析,并且通过T3后代筛选的方法得到了纯合体植株。在抗虫试验中,对每种转基因拟南芥类型,选取三个独立的、具有最高表达量的转基因株系来饲喂小菜蛾。实验结果表明PtdKTI5的转基因拟南芥具有最好的抗虫效果。本论文证实了这四种来自杂交杨的基因是潜在的抗虫基因,具有应用在基因工程方向上的潜力,从而为进一步培育转基因抗虫农作物新品种提供了新的途径。
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