神经系统的正常发育和生长是其周围环境中不同信号因子共同作用的结果。近年来的研究发现，这些因子包括靶部位分泌的特异性神经元轴突生长吸引因子（axon growth attractants）和非靶部位分泌的轴突生长排斥因子（axon growth repellents）。在胚胎发育期，这些因子以不同的时空模式在轴突的周围表达，它们的协同作用使得不同类型的轴突精确地投射到靶部位，构成复杂有序的神经网络，因此统称为轴突生长导向因子（axon guidancecues）。在成年期，这些因子的表达在正常轴突网络平衡的维持和中枢神经损伤后的再生中也起着重要的作用。本研究检测神经生长导向因子Sema 3A对体外培养鸡胚背根神经节（dorsal rootganglia，DRG）中神经生长因子（nerve growth factor，NGF）敏感性神经元轴突生长椎（growth cone）的致萎缩活性及其mRNA在不同发育期鸡胚脊髓中的表达情况，藉以探讨Sema 3A在鸡胚脊髓发育过程中对于轴突生长的导向作用，并试图阐明神经系统发育过程中轴突网络形成的分子机制。 本研究分为两部分：1、建立鸡胚背根神经节的体外培养方法并用含NGF的培养基培养NGF敏感性痛温觉神经元。培养18-24小时后，培养液中加入神经生长导向因子Sema 3A，观察生长椎形态变化。2、扩增含有Sema 3A编码序列的质粒并制备RNA探针，应用原位杂交技术检测Sema 3A mRNA在鸡胚不同发育期（E4、E6、E7、E8）脊髓中的表达。 结果：1、鸡胚DRG培养18-24小时后，有大量的轴突向外伸展，轴突末端膨大为生长椎，有丝状伪足和板状伪足在不停 南京医科大学硕士学位论文收动。加H Sema 3A后，丝状伪胁跳伪腑止了伸展，生怵缩回，状如枯枝，gF生长涨生了萎缩＊ollapsed）。2、在鸡胚发育的第 4天（E4），Sema 3A InRN表阴神经管周围和脊索。在 E6期和 E7期，Sema 3A表阴中央管周围和脊髓前角，以腹侧为著。到了ES期，它的表达主要集中在前角运动神经元，而其它部位的信号明显较弱。 神经轴突对神经生长排斥因子的急性反应是生长椎的萎缩；将神经元与分泌排斥因子的细胞共同培养时引起的慢性反应是轴突生长方向的改变网。在桐究中，Sema 3A能导致体外培养鸡胚DRG内NGF敏感性痛温觉神经元轴突生梆发生萎缩，证明Se；。a3A对DRG中NGF敏感性种经元的轴突生长具有导向作用。在民期到 E。期，Sema 3A的 InRNA表酗脊髓中央管周围、脊索和脊髓前角；无腹侧优势，其作用可能与阻止感觉神经元轴突进A脊髓灰质，形成等待期（waiting period）［’，’1有关。到民至 Es麻Sema 3A的mRN的表达向腹侧撤退，主要在脊髓中央管周围的腹侧（E；期）和前角运动神经元（E，、巳期），这样使背侧投射性的痛温觉神经元轴突仅进入脊髓后角第 I、11层而不进一步向腹侧投射。至于腹侧投射性的神经营养因子习（neurotrophin3，NT3）敏感性肌梭h类神经元和其它神经元轴突的等待期和定向投射，则更有可能是在其它类型的导向因子的共同参与下进行的［81