EGF、颗粒细胞共培养对山羊体外成熟卵母细胞GSH含量及超微结构的影响

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本试验旨在研究EGF、颗粒细胞共培养抑制山羊卵母细胞凋亡的作用,着重研究EGF、颗粒细胞共培养对卵母细胞GSH含量的影响;比较妊娠与未妊娠山羊卵母细胞内GSH水平的差异。研究EGF、颗粒细胞共培养对成熟卵母细胞脂滴、微绒毛、线粒体等变化的影响。为以后山羊卵母细胞、胚胎的各种操作提供可靠依据。从屠宰场收集卵巢,按妊娠与否分类,切割法采集卵母细胞。38.5℃、5%CO2、饱和湿度、培养24h。样品处理后测定卵母细胞GSH的浓度及观察超微结构的变化。结果如下:屠宰后得到的山羊卵母细胞中,妊娠本地山羊、未妊娠奶山羊的GSH含量分别为2.38 pmol/oocyte、3.52 pmol/oocyte。未添加EGF培养液中,妊娠本地山羊、未妊娠奶山羊成熟卵母细胞GSH含量分别为5.25 pmol/oocyte、6.68 pmol/oocyte,成熟后GSH含量大约是成熟前的两倍。添加EGF培养液中,妊娠本地山羊、未妊娠奶山羊成熟卵母细胞GSH含量分别为6.63 pmol/oocyte、8.14pmol/oocyte,与未添加EGF对照组相比,差异显著(P<0.05),表明成熟培养液中添加EGF可以提高卵母细胞中GSH的含量。采用添加EGF、与颗粒细胞共培养的方式成熟的卵母细胞,妊娠本地山羊、未妊娠奶山羊GSH含量分别为8.32 pmol/oocyte、10.24pmol/oocyte,与添加EGF对照组相比,差异显著(P<0.05)。表明与颗粒细胞共培养可以提高卵母细胞中GSH的含量。本地山羊与奶山羊在妊娠生理条件下GSH含量分别为6.57 pmol/oocyte、6.63 pmol/oocyte,差异不显著(P>0.05);表明山羊种属对GSH含量无显著影响。妊娠状态下,相同培养液中成熟的卵母细胞比未妊娠组GSH含量要低,差异显著(P<0.05)。体外培养成熟的卵母细胞,吸卵管反复吹打去除颗粒细胞,电子显微镜下观察其部分超微结构。结果如下:未添加EGF培养液中成熟的卵母细胞,大部分微绒毛从卵质膜中脱落、消失,细胞质中有大量体积大的脂滴,线粒体近似呈圆形且大部分呈现空泡化;添加EGF培养液中成熟的卵母细胞,细胞质中脂滴数量减少,体积小,大部分微绒毛附着于卵质膜表面,部分线粒体形态呈椭圆形,皮质颗粒在微绒毛密集处有成团分布现象;添加EGF,与颗粒细胞共培养方式成熟的卵母细胞大部分微绒毛附着于卵质膜表面,粗面内质网清晰可见,线粒体形态呈椭圆形,超微结构形态优于对照组。添加EGF,采用共培养方式成熟的卵母细胞,GSH含量高,超微结构更加健康。表明GSH可以做为卵母细胞适宜培养条件的评价指标。
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