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肾细胞癌(Renal Cell Carcinoma，RCC)是起源于肾小管上皮绌胞的恶性肿瘤，是最常见的肾癌类型，约占人类恶性肿瘤的3％，占所有肾癌的85％。RCC是多年来我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，并且发病率在持续增长。肾透明细胞癌(clear cell Renal Cell Carcinoma，ccRCC)是最常见、最具侵袭性的RCC亚型，约占RCC的80％，具有极高的局部侵袭性、死亡率以及对化疗和放疗的耐药性。miR-4521在多种恶性肿瘤和疾病中异常表达，目前鲜有对其机制的研究。FAM129A的异常表达与多种肿瘤密切相关。FAM129A高表达促进了甲状腺肿瘤侵袭及甲状腺结节的增生，是甲状腺肿瘤以及鉴别良恶性甲状腺结节的一个潜在的生物标志分子。但miR-4521与FAM129A在ccRCC进展中的研究尚无报道。 目的：1.研究ccRCC患者样本及ccRCC细胞系中miR-4521，FAM129A表达水平以及二者相关性;2.探讨miR-4521与FAM129A在ccRCC中的靶向负调控关系;3.研究miR-4521过表达对786-O、ACHN细胞生物学行为影响及作用机制;4.研究FAM129A敲降对786-O、ACHN细胞生物学行为影响及作用机制。 方法：1.qRT-PCR法检测miR-4521，FAM129A在55例配对ccRCC临床样本中表达水平;WB法检测FAM129A在37例配对ccRCC临床样中的表达情况;免疫组织化学(IHC)法检测FAM129A在30例配对ccRCC临床样中的表达情况及在细胞中的定位。2.qRT-PCR检测miR-4521和FAM129A在正常肾上皮细胞HK-2和肾透明细胞癌细胞786-O及ACHN中的表达情况。3.在786-O和ACHN细胞中瞬时转染过表达miR-4521，qRT-PCR法检测miR-4521上调效率;qRT-PCR法和WB法检测miR-4521过表达及FAM129A的表达水平。4.通过miRNA预测软件(TargetS can，microRNA.org)分析miR-4521与FAM129A间靶向关系;将重组双荧光素酶报告基因表达载体分别与miR-4521mimic和NC mimic共转染至786-O细胞中，检测双荧光素酶荧光强度值。5.MTT法检测miR-4521过表达后对786-O和ACHN细胞增殖能力的影响;Transwell法检测miR-4521过表达后对786-O和ACHN细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞仪分析法检测miR-4521过表达对786-O和ACHN细胞凋亡的影响;WB法检测miR-4521上调后TIMP-1，MMP2，MMP9，MDM2，P53，Bcl2，Bax的表达情况。6MTT法检测FAM129A敲降后对786-O和ACHN增殖能力的影响;Transwell法检测FAM129A敲降后对786-O和ACHN迁移和侵袭能力的影响;流式细胞仪分析法检测FAM129A敲降后对786-O和ACHN凋亡的影响;WB法检测FAM129A敲降后TIMP-1，MMP2，MMP9，MDM2，P53，Bcl2，Bax的表达水平。 结果：1.与正常组织相比，miR-4521在ccRCC组织中低表达，且表达水平随TNM分期和Furhman分级负相关性明显;与正常组织相比，在ccRCC组织中FAM129A的mRNA和蛋白水平都呈高表达，其表达水平随着TNM分期和Furhman分级的升高而升高;在ccRCC样本中，miR-4521和FAM129A的表达水平呈负相关（P=0.0001）;FAM129A主要在细胞质中表达。2.与正常肾上皮细胞HK-2相比，miR-4521在ccRCC细胞786-O与ACHN中低表达，FAM129A在786-O与ACHN中高表达，其结果与临床样本结果一致。3.瞬时转染miR-4521mimic后，miR-4521在786-O与ACHN细胞中分别上调1820倍（P=0.01）和920(P=0.02)倍;同时，FAM129A在mRNA和蛋白水平相对于NC mimic组明显降低。4.双荧光素酶报告基因实验表明，在重组双荧光素酶报告基因表达载体突变型组中，NC mimic组与miR-4521mimic组的双荧光素酶检测活性无明显差异，但野生型组中，与NC mimic相比，miR-4521mimic组的检测活性相对于NCmimic组降低38.2％（P=0.001）;5.miR-4521过表达抑制786-O与ACHN细胞的增殖，迁移和侵袭，促进了786-O与ACHN细胞的凋亡;同时TIMP-1，P53和Bax的表达水平升高，而MMP2，MMP9，MDM2和Bcl2表达水平降低。6.FAM129低表达抑制786-O与ACHN细胞的增殖，迁移和侵袭，促进了786-O与ACHN细胞的凋亡;同时TIMP-1，P53和Bax的表达水平升高，而MMP2，MMP9，MDM2和Bcl2表达水平降低。 结论：1.miR-4521在患者组织中表达水平降低与ccRCC临床进展相关;FAM129A在患者组织中表达水平升高与ccRCC临床进展相关;FAM129A主要表达在细胞质中;miR-4521与FAM129A在ccRCC患者组织及ccRCC细胞株中表达水平负相关性明显。2.过表达miR-4521抑制FAM129A在ccRCC细胞中的表达;miR-4521靶向结合FAM129A基因的3-UTR区，进而负调控FAM129A表达。3.miR-4521过表达通过促进TIMP-1表达，降低MMP2，MMP9表达，进而降低786-O和ACHN细胞的体外增殖和迁移侵袭能力;miR-4521过表达降低MDM2表达促进P53表达，而Bcl2水平降低，Bax水平升高促进786-O和ACHN细胞凋亡。4.FAM129敲降促进TIMP-1表达，降低MMP2，MMP9表达，进而降低786-O和ACHN细胞的体外增殖和迁移侵袭能力;FAM129敲降降低MDM2表达促进P53表达，Bcl2水平降低，Bax水平升高促进786-O和ACHN细胞凋亡。