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目的:1、应用HUVEC细胞培养技术建立体外血脑屏障模型;2、探索在缺血缺氧条件下tPA对血脑屏障内皮细胞的保护作用,寻找tPA除溶栓以外的生物学效应,尤其对神经血管单元的保护作用。
方法:利用Transwell培养小室为支架,以人脐静脉内皮细胞为研究对象建立体外血脑屏障(Blood-Brain Barrier,BBB)模型;利用厌氧培养箱及无糖培养液氧糖剥夺(Oxygen and Glucose Deprivation,OGD),建立体外缺血缺氧模型;用不同浓度tPA作用于BBB后,利用MTT检测血脑屏障内皮细胞活性;用流式细胞技术检测tPA对人血脑屏障内皮细胞细胞周期的影响;通过ELISA方法检测缺血缺氧条件下tPA促进血脑屏障内皮细胞分泌VEGF(Vascularendothelial growth factor)的水平。
结果:1、在OGD条件下,特定tPA药物浓度可以使HUVEC活性增强,tPA40μg/ml对HUVEC不具有保护作用(P＞0.05);而tPA20μg/ml、10μg/ml、0.625μg/ml和0.3125μg/ml与细胞对照组比较均有显著差异(P＜0.05);2、在OGD条件下,特定tPA药物浓度对HUVEC细胞周期有明显影响,反映在G0/G1期,随着tPA浓度的增高,HUVEC细胞G0/G1期所占比例逐渐升高,其比例分别为61.38％,62.45％,65.15％。3、在OGD条件下tPA可活化HUVEC分泌VEGF,随着tPA浓度降低而VEGF表达增加。
结论:1.应用HUVEC建立具有生理条件下血脑屏障相似的结构特点的体外血脑屏障模型;2.在OGD条件下,tPA对BBB内皮细胞HUVEC具有保护作用;3.tPA对BBB内皮细胞HUVEC具有保护作用还表现为它对细胞周期的影响,它可以使BBB内皮细胞HUVEC阻滞在G0/G1期,使细胞处在休眠状态下免受损伤;4.在OGD条件下,tPA对BBB内皮细胞HUVEC的保护作用与tPA刺激BBB内皮细胞分泌VEGF有关。