【摘 要】
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第一部分 建立HBV cccDNA的PCR检测体系 目的: 建立一种HBV cccDNA的PCR检测体系。 材料与方法: 利用HBV cccDNA与rcDNA分子一级结构之间的差异,设计两对引物进
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第一部分 建立HBV cccDNA的PCR检测体系 目的: 建立一种HBV cccDNA的PCR检测体系。 材料与方法: 利用HBV cccDNA与rcDNA分子一级结构之间的差异,设计两对引物进行巢式PCR反应,使cccDNA的扩增效率显著地高于rcDNA,从而通过其产生的差距,判断待测标本中是否存在cccDNA。此外,在巢式PCR首轮中,设计一对引物扩增HBV S区基因保守区域,作为检测体系的内参照。 以含HBV基因全序的PBHB4质粒DNA作为HBV cccDNA的标准品,以DANE颗粒抽提的HBV DNA作为HBV rcDNA的标准品,经过荧光定量检测确定HBV DNA浓度。将上述标准品进行系列稀释后作为PCR检测的模板,分别获得检测体系对HBV cccDNA和HBV rcDNA的检测灵敏度,从而确定合适进行HBV cccDNA检测的HBV DNA模板浓度范围。
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