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研究证实，糖尿病（Diabete mellitus，DM）患者体内的高糖环境可造成非酶糖基化终末产物（Advanced glycation end products，AGEs）在男性生殖道中大量积累，并与生精上皮、附睾及精子中表达的糖基化终末产物受体（Receptor for advanced glycation end products，RAGE）结合，并导致男性生殖机能障碍。目前尚不清楚AGEs对睾丸间质（Leydig）细胞睾酮分泌的影响。本研究探讨了AGEs对大鼠Leydig细胞睾酮分泌的影响，并对其作用机理进行了初步研究，现将结果报告如下。 （1）体外培养原代大鼠睾丸Leydig细胞，采用RT-PCR、免疫荧光方法检测糖基化终末产物受体（Receptor for advanced glycation endproducts，RAGE）在大鼠Leydig细胞中的表达；采用ELISA方检测不同浓度AGEs（25、50、100、200μg/mL）处理对Leydig细胞睾酮分泌的影响。结果表明，RAGE能在大鼠睾丸Leydig细胞上表达；hCG处理能显著促进睾酮合成（P<0.01）；AGEs处理Leydig细胞后，hCG诱导的睾酮合成量呈现下降趋势，与hCG处理相比，用50、100、200μg/mL AGEs处理的Leydig细胞睾酮合成量分别降低26.2%、41.3%和51.4%（P<0.01）。 （2）采用不同浓度的AGEs（50、100、200 μg/mL）处理Leydig细胞，荧光定量PCR和Western-Blot检测睾酮合成关键蛋白（StAR、3β-HSD和P450scc）mRNA的转录水平及蛋白表达量。结果表明：AGEs处理细胞12 h后，StAR、3β-HSD和P450scc mRNA的表达量呈下降趋势，其中100 μg/mL AGEs处理组StAR、P450scc和3β-HSD mRNA的转录水平与对照组相比分别下降了16.4%、10.4%和11.6%，与对照组差异显著（P<0.05）；200μg/mL AGEs处理组分别降低了45.8%、33.2%和18.7%，差异极显著（P<0.01）。AGEs处理Leydig细胞24 h后，StAR、3β-HSD和P450scc mRNA的转录均显著低于对照组（P<0.01）。Western-Blot结果表明经AGEs处理48小时后，与对照组相比，3β-HSD、P450scc和StAR的蛋白水平以剂量依赖方式降低，在200μg/mL的AGEs作用下，StAR、3β-HSD和P450scc分别下降了42.2%、35.9%和49.2%，均显著低于对照组（P<0.01）。 （3）为了证实氧化应激（Oxidative Stress，OS）和内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress，ERS）在AGEs抑制睾丸间质细胞分泌睾酮中的作用，采用抗氧化剂NAC预处理Leydig细胞，DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（Reaetive Oxygen Species，ROS）的含量。结果表明，NAC 能显著抑制 AGEs 引起的睾酮分泌下降（P<0.01）；且随着AGEs浓度的升高，Leydig细胞内ROS含量随之增加，并呈现剂量依赖性，200μg/mL AGEs处理组ROS含量极显著地高于对照组1.61倍（P<0.01）。上述结果证实，AGEs通过OS抑制了Leydig细胞睾酮的分泌。 采用ERS抑制剂TUDCA预处理Leydig细胞后，TUDCA显著抑制AGEs引起的睾酮分泌下降（P<0.01）。Western Blot检测结果表明，随着AGEs浓度的升高，ERS标志性蛋白 CHOP 和 GRP78的表达水平显著升高（P<0.05），特别是经 200 μg/mL AGEs处理后，CHOP和GRP78蛋白的表达水平明显增高，分别是对照组的2.40倍和2.51倍，组间差异极显著（P<0.01），提示AGEs通过ERS抑制了睾酮的分泌。 （4）为了进一步探讨AGEs作用于Leydig细胞的信号通路，观察了Leydig细胞ERK1/2 蛋白磷酸化的变化情况。结果表明，经过 hCG 处理的Leydig细胞ERK1/2 蛋白磷酸化明显升高，是对照组的3.29倍，差异极显著（P<0.01），加入AGEs后，ERK1/2蛋白磷酸化下降，与hCG组相比，50、100、200μg/mL的AGEs处理组ERK1/2蛋白磷酸化水平分别比对照组显著下降了6.32%、28.8%和61.6%（P<0.01），且呈剂量依赖性。上述结果表明，AGEs可通过抑制ERK1/2信号通路影响Leydig细胞睾酮的分泌。 综上所述，RAGE可在大鼠睾丸Leydig细胞中表达，AGEs通过诱导OS、ERS、抑制 ERK1/2 信号通路等，抑制 Leydig 细胞中关键蛋白 StAR、3β-HSD 和 P450scc的表达，进而抑制睾丸Leydig细胞睾酮的分泌。本研究揭示了AGEs抑制大鼠Leydig细胞睾酮分泌的作用及机理，为防治糖尿病引发的男性生殖功能紊乱提供了理论依据。