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目的:
1．探讨儿童刺激性全唾液中总蛋白含量与乳牙龋易感性的关系。
2．分析唾液中不同分子量蛋白与乳牙龋易感性的关系。
3．免疫印迹法定量检测儿童刺激性全唾液中的溶菌酶和乳铁蛋白，分析其与乳牙龋易感性的关系。
方法:
在本课题组前期广州从化市(县级市)进行的幼儿龋病流行病学调查基础上，采用单纯随机抽样的方法分别选取4～5岁、性别匹配的高龋(dmft≥5)和无龋(dmft=0)儿童各40名作为研究对象。用吐取法获得刺激性全唾液约3 ml，4℃离心后取上清分装、编号，-80℃低温保存备用。BCA法测定唾液总蛋白含量。 SDS-PAGE凝胶电泳分离刺激性全唾液中的蛋白组份，考马斯亮蓝R-250染色液染色，脱色完全后用Ultra-lum Omega多功能化学发光成像系统对凝胶进行扫描，用1D Scan Ex专业凝胶图像分析软件分析扫描图像，测得目标条带的IOD值。免疫印迹法检测儿童刺激性全唾液中溶菌酶和乳铁蛋白，化学发光法获得目标条带的X光胶片影像，image-pro plus 5.0专业图像分析软件分析扫描图像，测得目标条带的IOD值。分析不同龋易感性儿童刺激性全唾液中溶菌酶和乳铁蛋白的差异，探讨溶菌酶和乳铁蛋白含量与乳牙龋易感性的关系。
收集的所有数据资料均录入Excel建立数据库，根据原始资料多次进行核对以确保无误。实验结果导入SPSS13.0统计软件包进行统计学分析，采用两组独立样本t检验，检验水准α定为双侧0.05。
结果:
儿童刺激性全唾液中总蛋白含量(μg/ml)BCA法测定结果，高龋组儿童总蛋白含量为852.02±206.14，其中男童总蛋白含量为840.07±191.89，女童总蛋白含量为863.97±223.84；无龋组儿童总蛋白含量为1032.44±221.99，其中男童总蛋白含量为1010.69±200.80，女童总蛋白含量为1054.19±244.62。经t检验，高龋组儿童刺激性全唾液中总蛋白含量低于无龋组(P<0.01)；高龋组女童唾液中总蛋白含量较无龋组女童低(P=0.014)；男童两组之间唾液中总蛋白含量的差异亦为高龋组低于无龋组(P=0.009)。不同性别儿童之间唾液中总蛋白含量无显著性差异(P=0.518)。 SDS-PAGE凝胶电泳分离儿童刺激性全唾液，可以分离出7～14条可分析蛋白条带，平均每个样品分离出10条条带。其中约10 kD、14.5 kD、28 kD、38 kD、56 kD、77 kD位置的6种不同分子量蛋白的条带稳定出现。不同分子量蛋白的丰度值代表其在唾液中的体积含量。相同体积唾液中，分子量为10 kD的蛋白丰度值(IOD)高龋组儿童为181.604±72.121，无龋组儿童为176.224±85.372；分子量为14.5 kD的蛋白丰度值高龋组儿童为56.875±33.213，无龋组儿童为58.173±42.654；分子量为28 kD的蛋白丰度值高龋组儿童为117.072±67.145，无龋组儿童为99.248±50.908；分子量为38 kD的蛋白丰度值高龋组儿童为149.603±57.882，无龋组儿童为141.122±56.544；分子量为56 kD的蛋白丰度值高龋组儿童为547.468±267.513，无龋组儿童为468.461±203.527；分子量为77 kD的蛋白丰度值高龋组儿童为76.729±43.559，无龋组儿童为64.893±33.939。经t检验，相同体积唾液中，高龋组和无龋组儿童之间刺激性全唾液中6种不同分子量蛋白丰度值相比均无显著性差异，各P值均大于0.05。不同分子量蛋白的丰度值与相应个体样品唾液蛋白总上样量的比值，即唾液中不同分子量蛋白占总蛋白量的百分含量。经t检验，高龋组与无龋组之间刺激性全唾液中10 kD、28 kD、38 kD、56 kD、77 kD分子量蛋白百分含量均为高龋组高于无龋组，差异有统计学意义，P值依次为0.023、0.005、0.006、0.001和0.009；14.5 kD分子量蛋白的百分含量高龋组与无龋组相比无显著性差异(P=0.137)。
利用溶菌酶和乳铁蛋白的单克隆抗体，免疫印迹法检测儿童刺激性全唾液中的溶菌酶和乳铁蛋白。相同体积唾液中，高龋组儿童溶菌酶丰度值(IOD)为2014.593±1351.913，无龋组儿童溶菌酶丰度值为1860.041±1251.256；高龋组儿童乳铁蛋白丰度值为1364.566±1056.902，无龋组儿童乳铁蛋白丰度值为1090.093±802.360。经t检验，相同体积唾液中，高龋组和无龋组儿童之间刺激性全唾液中溶菌酶和乳铁蛋白丰度值均无显著性差异，P值依次为0.597和0.195。高龋组与无龋组间之间刺激性全唾液中乳铁蛋白的百分含量为高龋组高于无龋组(P=0.018)。高龋组与无龋组相比，溶菌酶的百分含量无显著性差异(P=0.091)。
结论:
1.高龋组儿童刺激性全唾液中总蛋白含量低于无龋组，不同性别儿童之间唾液中总蛋白含量无显著性差异。
2.儿童刺激性全唾液经15﹪SDS-PAGE凝胶电泳约可分离出10条条带，其中10 kD、14.5 kD、28 kD、38 kD、56 kD、77 kD 6种分子量范围的唾液蛋白含量较多且稳定。
3.高龋组和无龋组儿童之间相同体积刺激性全唾液中10 kD、14.5 kD、28 kD、38 kD、56 kD、77 kD 6种不同分子量蛋白的丰度值均无显著性差异；10 kD、28kD、38 kD、56 kD、77 kD分子量蛋白的百分含量均为高龋组高于无龋组；14.5kD分子量蛋白的百分含量两组间无显著性差异。
4.高龋组和无龋组儿童之间相同体积刺激性全唾液中溶菌酶和乳铁蛋白丰度值均无显著性差异；高龋组刺激性全唾液中乳铁蛋白占总蛋白量的百分含量高于无龋组；溶菌酶的百分含量高龋组与无龋组相比无显著性差异。