分子生物学、基因工程技术等生命科学学科的不断进步，使得药用昆虫的研究得以深入到分子水平。本论文开展了三个昆虫蛋白基因的分子克隆、表达和功能研究。 1.桑天牛抗菌肽AgCRP(Apriona gemari Cysteine Rich Protein)基因的分子克隆、表达和功能研究首先，通过桑天牛幼虫的表达序列标签(ESTs)筛选到了目标基因，用RT-PCR技术，成功克隆了AgCRP基因。测序结果表明，AgCRP基因序列全长为207bp，可编码69个氨基酸残基的蛋白。经NCBI数据库检索和氨基酸序列比对分析，AgCRP成熟肽与长角天牛(AcalDlepta luxuriosa)抗菌肽AlCRP最为接近，两者同源性达62％；与其他昆虫抗菌肽一样，AgCRP也具有能形成CSαβ模块(Cysteine Stabilized αβ motif)的“C…CXXXC…C…CXC”保守序列。AgCRP属首次报道的基因序列，已在GenBank登录(登录号：AY771360)。 通过Nonthem blot杂交确定了AgCRP特异表达于桑天牛的脂肪体，并可被伤害、细菌或真菌等刺激上调。证明了AgCRP属于昆虫防御素型抗菌肽。 将克隆到的AgCRP基因作EcoR I和Xho I双酶切后连接到pBac-1质粒相应的多克隆位点上，获得重组杆状病毒转移载体pBac-CRP。然后在无血清条件下，以Lipofectin介导bAcGOZA杆状病毒DNA与pBac-CRP共转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf-9尾虫细胞，细胞呈明显感染形态，这是AgCRP基因首次在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的表达。 2.红光熊蜂(Bombus ignitus)蜂毒蛋白酶(BiVP)和脂酶(BiLP)基因的分子克隆、表达及功能研究首先，通过红光熊蜂的ESTS筛选到了目标基因，用RACE-PCR和RT-PCR技术，分别成功克隆BiVP基因和BiLP基因，测序结果表明，两者的核苷酸序列全长分别1083bp和954bD，可分别编码360个氨基酸残基和317个氨基酸残基的蛋白。推测两个蛋白的分子量分别为38.3kD和34.3kD。经NCBI数据库检索和氨基酸序列比对分析，BiVP具有极为保守的由His、Asp和Ser构成的催化三联体(catalytic triad)活性中心，属于丝氨酸蛋白酶；BiLP具有脂酶蛋白的特征保守序列“GXSXG”，属于脂酶类蛋白；两者均属首次报道的基因序列，其中BiLP基因已在GenBank登录(登录号：EU443786)。通过Northem blot杂交对BiVP和BiLP基因的特异性表达进行了考察。两者均特异表达于红光熊蜂的脂肪体。 将克隆到的BiNP和BiLP基因作Xho I和BamH I双酶切后连接到pBac-1质粒相应的多克隆位点上，获得重组杆状病毒转移载体pBacl-BiVP和pBacl-BiLP。然后在无血清条件下，以Lipofectin介导与bAcGOZA杆状病毒DNA共转染草地夜蛾Sf-9昆虫细胞，细胞呈明显感染形态，这是BiVP和BiLP基因首次在杆状病毒．昆虫细胞表达系统中的表达。 以快速蛋白液相色谱法纯化了重组BiVP蛋白，纯化程度约51倍，收率达到了57.8％。在酶活性研究中，发现重组BiVP蛋白的酶活性最适pH值为pH3.0，并在pH2.O～5.0的范围内能够保持活性的稳定。在pH3.0时，其最适温度为45℃，并且能在该温度下保持活性稳定至少10min。本研究实现了对BiVP重组蛋白酶活性的首次检测。