【摘 要】
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本研究以烟草NC89种子为材料,在MS培养基(附加20g/L蔗糖)上培养无菌苗,继代培养3~4代后,取叶盘为外植体接种在不同的培养基上,研究不同浓度的潮素(Hyg)对愈伤组织分化和芽再
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本研究以烟草NC89种子为材料,在MS培养基(附加20g/L蔗糖)上培养无菌苗,继代培养3~4代后,取叶盘为外植体接种在不同的培养基上,研究不同浓度的潮素(Hyg)对愈伤组织分化和芽再生的影响,确定了25mg/LHyg为烟草再生的选择压力.以NC89无菌苗叶片为外植体,用携带hBMP-3m基因的根癌农杆菌浸染烟草,研究根癌农杆菌介导师的的遗传转化,经过诱导筛选分化培养,生根培养,最终获得了烟草的Hyg抗性植株.由hBMP-3m基因两端序列及35S启动子序列和hBMP-3m基因末端序列分别成两对引物,对抗性植株总DNA进行PCR检测:提取烟草总蛋白,进行SDS-PAGE和WesternBlot检测.通过研究主要获得了以下结果:1.将hBMP-3m植物表载体pCAMBIA1300-B3m通过冻融法导入根癌农杆菌LBA4404.2.经潮霉素(Hyh)筛先转化体浓度梯度实验,确定Hyg对转化不定芽的适宜筛选浓度为25mg/L.3.建立了以烟草NC89无菌苗叶盘为外植体的遗传转化体系,利用农杆菌介导法将1300-B3m基因导入烟草,最终获得了Hyg抗植株.4.经PCR证实部分抗性植株已将人骨形成蛋白-3成熟肽基因整合到烟草基因组中,首先获得了含hBMP-3m基因的烟草转化植株.5.WesternBlot结果显示在转基因烟草中有微量BMP生成.
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