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目的:
1、通过研究鼻咽癌细胞株CNE一1与重组TFARl9蛋白共同培养后CNE～1细胞株的凋亡比率,对重组TFAR19蛋白的促凋亡效应提供有效的观察指标。
2、通过测定鼻咽癌细胞株CNE一1与重组TFAR19蛋白共同培养前后CNE一1细胞株的端粒酶活性及hTERq、mRNA表达的变化,对重组TFARl9蛋白促凋亡的作用机理进行初步探讨。
方法:
将不同浓度的高纯度重组TFAR19蛋白分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养后:
1、通过DNA片断化分析,PI染色,7一AAD及Annexin V-PE标记进行流式细胞仪分析,观察TFAR19蛋白对细胞的促凋亡效应及凋亡百分率。
2、通过RT-PCR法比较两组CNE一1细胞株(是否与重组TFAR19蛋白共同培养)端粒酶hTERI、mRNA的表达水平。
3、通过TRAP一银染法检测与重组TFAR19蛋白共同培养后,观察CNE一1细胞株端粒酶活性的改变。
结果：
1、一定浓度的TFAR19蛋白在未加载体的情况下，可促进细胞凋亡，加入5mg／L，10 mg／L，15 mg／L，20 mg／L，30 mg／L的TFARl9蛋白后，鼻咽癌细胞株CNE-1的凋亡率分别是：15.26％，29.48％，37.11％，54.20％，72.36％。阴性对照组的细胞凋亡率是13.40％。
2、两组CNE-1细胞株(是否与重组TFAR19蛋白共同培养)端粒酶hTERT mRNA表达无显著差异。
3、加入20 mg／L和30 mg／L的重组TFAR19蛋白后，CNE-1细胞株端粒酶活性降低。5mg／L，10 mg／L，15 mg／L的重组TFARl9蛋白对CNE-1细胞株的端粒酶活性无明显影响。
结论：
1、重组TFAR19蛋白可直接进入鼻咽癌细胞株CNE-1，明显促进细胞凋亡，且对细胞的凋亡作用呈剂量依赖性。
2、重组TFAR19蛋白对鼻咽癌细胞株CNE-1的端粒酶hTERT mRNA表达无明显影响。
3、重组TFAR19蛋白在较高浓度下可降低鼻咽癌细胞株CNE-1的端粒酶活性，可能对肿瘤细胞的恶性增殖有抑制作用。