目的:　　 1、观察缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型新生大鼠心肌损伤及细胞凋亡情况。　　 2、研究心脉隆(xinmailong,XML)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型新生大鼠心肌损伤及细胞凋亡的影响,及其与磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路活化的关系。　　 方法:　　 1、新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型制作及分组:128只新生7d龄SD大鼠随机分为4组(每组32只):1.假手术对照组(Sham组)；2.缺氧缺血性脑损伤模型对照组(HIBD组)；3.HIBD+心脉隆组(XML组):4.HIBD+XML+特异性PI3K阻滞剂LY294002组(LY组)。结扎实验鼠左颈总动脉后吸入8％浓度氧2.5h制成HIBD模型。Sham组仅游离出左颈总动脉,不结扎,缝合皮肤,不缺氧；HIBD组缺氧缺血(HI)后不给于任何药物进行干预:XML组于HIBD模型建立后迅速取出大鼠,复氧30min后给与5mg/kgXML注射液腹腔注射(i.p)；LY组则先后给与LY294002(0.3mg/kg ip)及XML注射液(5mg/kg ip),两种药物给药间隔时间为1.5min。各组均于HI后24h、48h、72h、7d四个时间点(每个时间点各8只)分批取血及心肌组织进行各项指标的检测。　　 2、观察各组实验大鼠实验过程中一般表现及存活情况,并计算其存活率及7d体重增长值:测定血清心肌酶CK、LDH水平；HE染色后光镜下观察心肌组织病理形态学改变；Hoechst33258荧光染色及TUNEL法分别定性和定量检测心肌细胞凋亡；S-P免疫组织化学法测定PI3K、p-Akt信号蛋白表达。　　 结果:　　 1、一般表现:Sham组实验过程中无明显变化,其余3组实验鼠置于缺氧环境5-10分钟后开始躁动不安,15-20分钟后活动减少,均趴伏于容器一角,并相继出现不同程度的缺氧症状；恢复通气后短时间内可出现头向结扎侧旋转爬行等行为学改变。　　 2、存活率:Sham组存活率为100％(32/32)；HIBD组存活率为87.50％(28/32)；XML组存活率为93.75％(30/32),LY组存活率为81.25％(28/32)。各组间存活率比较无明显统计学差异(P>0.05)。　　 3、7d体重增长值:HIBD组实验大鼠体重增长较缓慢,7d体重增长值(为14日龄体重-7日龄体重)显著落后于Sham组(P<0.01),XML组较HIBD组实验大鼠7d体重增长值显著增加(P<0.01),但仍明显落后于Sham组(P<0.01),LY组与其余3组比较实验大鼠7d体重增长值均显著滞后(P<0.01)。　　 4、血清心肌酶CK、LDH水平:Sham组各时间点CK、LDH浓度无明显变化(P>0.05)；其余3组上述指标均于HI后24小时开始升高,72小时达到高峰,之后逐渐下降,持续至7d仍显著高于Sham组(P<0.01),各时间点之间比较差异有统计学意义(P<0.01):相同时间点:XML组CK、LDH水平显著低于HIBD组(P<0.01),LY组CK、LDH水平与HIBD组及XML组比较均显著升高(P<0.01)。　　 5、心肌组织病理改变:HE染色、光学显微镜下观察可见Sham组大鼠心肌细胞排列规则,组织间无水肿,结构完整,胞浆中横纹清楚,细胞质均匀淡染,细胞核致密清晰可见；HIBD组及LY组均可见心肌细胞排列紊乱,细胞水肿明显,心肌间质出血,部分细胞出现坏死,核消失,细胞呈空泡样,心肌纤维成波浪状改变,但细胞凋亡不明显。(上述改变以LY组HI后72h最为显著)；相同时间点:XML组上述改变较HIBD组及LY组均明显减轻,心肌间质出血及细胞坏死不明显。　　 6、心肌细胞凋亡形态学改变:Hochst33258染色,荧光显微镜下观察可见Sham组细胞核边界规则整齐,染色均匀并淡染呈正常的蓝色；其余3组均可见凋亡染色阳性细胞,数目多少不一,以LY组HI后72h最为多见,表现为细胞核致密浓染、皱缩、碎裂、颜色透亮有些发白；相同时间点:XML组凋亡阳性细胞数较HIBD组及LY组均明显减少。　　 7、心肌细胞凋亡指数(AI)结果分析:Sham组各时间点均仅见散在凋亡细胞；其余3组AI均于HI后24h开始升高,72h达到高峰,持续至7d时仍高于Sham组(P<0.01),各时间点之间比较有明显差异(P<0.01)。相同时间点:XML组与HIBD组相比AI明显降低(P<0.01)；LY组AI水平与HIBD组及XML组比较均显著升高(P<0.01)。　　 8、心肌组织PI3K、p-Akt信号蛋白表达:　　 8.1、心肌组织P13K信号蛋白表达:各组均可见PI3K蛋白表达阳性信号。相同时间点:各组间比较均无显著性差异(P>0.05)；相同处理组:各时间点之间比较均无统计学差异(P>0.05)。　　 8.2、心肌组织p-Akt信号蛋白表达:Sham组p-Akt蛋白呈弱阳性表达,组内各时间点之间无显著性差异(P>0.05)；而HIBD组、XML组p-Akt蛋白表达水平均明显增高,且均于HI后24h表达最为明显,之后逐渐下降,持续至7d仍高于Sham组(P<0.01),组内各时间点比较差异有统计学意义(P<0.01)。相同时间点:XML组与HIBD组比较p-Akt蛋白表达水平进一步显著升高(P<0.01)；LY组p-Akt蛋白表达水平与HIBD组、XML组相比均明显降低(P<0.01),与对照组相比,则差异无统计学意义(P>0.05)；LY组各时间点之间比较无显著性差异(P>0.05)。　　 9、心肌组织PI3K、p-Akt与AI之间进行相关性分析:p-Akt表达与AI呈明显负相关性(r=-0.883,P<0.001),而。PI3K与AI之间无明显相关性(r=-0.150,P>0.05)。　　 结论:　　 1、新生大鼠HIBD后早期心肌细胞即可出现一定程度的损伤及凋亡,以HI后72h最为明显,持续至HI后7d仍可见异常损伤及凋亡细胞。　　 2、PI3K/Akt信号途径可能参与了HIBD模型建立本身所启动的自我保护机制,从而发挥一定程度的内源性心肌保护及抗凋亡作用。　　 3、药物心脉隆通过PI3K/Akt信号通路介导对HIBD模型新生大鼠心肌损伤及细胞凋亡的抑制作用。　　 4、PI3K阻滞剂LY294002可取消心脉隆的上述心肌保护及抗凋亡作用,并可能在一定程度上阻断了HIBD模型建立本身所启动的内源性细胞生存信号途径的激活。　　 5、LY294002上述作用的发挥主要体现在阻断Akt的磷酸化而并不显著降低PI3K的表达水平。