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实验以桑叶(Folium Mori)为研究材料,提取、分离、纯化得到一酸性 蛋白多糖,并初步研究了其理化性质和生物学药理活性。
实验分为四个部分:
第一部分主要研究桑叶酸性蛋白多糖的提取、分离、纯化及其结构鉴定:桑叶粉碎脱脂后加水煎煮,减压浓缩提取液,醇沉,干燥得桑叶粗多糖。经D1O1大孔树脂,脱蛋白,脱色,DEAE-32阴离子纤维素柱及Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析对产物进行分离纯化,得桑叶多糖纯品。通过IR、UV、HPLC、<13>C-NMR、<1>H-NMR、氨基酸组成测定等方法分析其理化性质。实验结果显示:该多糖为桑叶酸性蛋白多糖(APFM),分子量超过50万,且分布均一,组成单体为α-型吡喃糖,含糖醛酸和硫酸基,主要由D-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-果糖、D-葡萄糖、D-半乳糖组成,其摩尔比为8.91:2.71:1.00:3.75:6.04。其蛋白质部分含17种氨基酸,其中7种为人体必需氨基酸。
第二部分主要研究APFM的抗氧化作用:实验结果表明APFM可以有效清除化学模拟体系中形成的HO·和·O<,2><->,抑制小鼠脏器在该体系和糖尿病模型中MDA的形成和积累,明显减轻HO·诱导的小鼠肝线粒体的肿胀和模型小鼠脏器中SOD活性的降低,并都存在明显的量效关系。可以认为APFM具有良妊的体外和体内的抗氧化作用,是一种有效的自由基淬灭剂。
第三部分主要研究APFM对重金属铅和镉胁迫下人正常肾细胞生长抑制的缓解作用:实验发现,低浓度的APFM能促进人正常肾细胞HEK293的生长,并能显著缓解铅和镉对HEK293细胞生长的抑制作用,其中25μg·ml<-1>和50μg·ml<-1>浓度试验组的效果最明显。实验还发现,铅和镉对HEK293细胞生长的抑制作用有一个渐进的累积过程,这种胁迫作用存在浓度和时间两个因素,APFM能在一定时间和浓度范围内缓解由重金属引起的HEK293细胞生长的抑制作用,但不能恢复细胞正常的生长状态。
第四部分主要研究APFM对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的降糖降脂作用:实验结果显示,随着给药时间的延长,APFM能显著减轻糖尿病小鼠多饮、多食、多尿的症状,降低糖尿病小鼠的血糖值。且中剂量组的效果最佳,四周后其血糖值与正常组比无显著差异,血糖曲线下面积与模型组有显著差异(P<0.05)。APFM还能减少小鼠血清中的NO、NOS、TL、TC含量,提高血清中HDL含量。表明APFM能有效降低糖尿病小鼠的高血糖和高血脂。