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目的:肺动脉高压(PAH)的病理学特点是肺血管重构,肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的结构及功能异常是肺血管重构的中心环节。近年发现肺血管重构中PASMCs表现出异常增殖的类肿瘤现象。为探索抗肿瘤药物对于PAH的治疗前景,本课题研究低浓度紫杉醇(PTX)对大鼠PASMCs增殖、迁移、表型转换等生物学行为的影响及其机制,为探索新的PAH治疗药物提供实验基础及理论依据。方法:1、使用SD大鼠肺动脉组织块贴壁培养原代PASMCs,采用细胞形态学观察法、细胞免疫组织化学法及免疫荧光染色平滑肌细胞标志基因α-SMA鉴定PASMCs;2、实验分别设立对照组(control组)、诱导组(PDGF-BB组)、实验组(PDGF-BB+PTX组);对照组:正常培养的PASMCs;诱导组:利用PDGF-BB诱导的PASMCs增殖、迁移、表型转换;实验组:利用低浓度(非细胞毒浓度)的紫杉醇干预PDGF-BB诱导的PASMCs;3、CCK-8法检测各组细胞增殖能力;4、流式细胞术检测各组细胞周期、凋亡;5、划痕实验法观察各组细胞迁移能力;6、RT-qPCR及Western Blot分别检测各组细胞表型转化标志基因α-SMA及SM22α的mRNA水平及蛋白水平的表达;7、免疫荧光法观察各组细胞骨架微丝F-actin及微管α-tubulin、β-tubulin的构象。结果:1、贴壁培养大鼠肺动脉组织块,培养第4-6d细胞逐渐从组织块边缘萌出,经传代自然纯化后,细胞呈长梭形,细胞融合成片后呈现“波峰波谷样”排列,免疫组织化学及免疫荧光鉴定均显示PASMCs纯度满意,α-SMA阳性细胞率达95%以上,适用于研究PASMCs增殖、迁移及表型转换等细胞生物学行为;2、与对照组比较,PDGF-BB组PASMCs增殖与迁移能力明显增强,并且α-SMA及SM22α的mRNA及蛋白表达下调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与PDGF-BB组相比,低浓度紫杉醇组PASMCs增殖与迁移能力明显降低,并且α-SMA及SM22αmRNA及蛋白表达上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);3、与PDGF-BB组比较,紫杉醇组细胞周期G2/M期细胞率明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);对照组、PDGF-BB组及低浓度紫杉醇组三组之间细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);4、与对照组比较,PDGF-BB组细胞骨架荧光强度明显减弱,F-actin排列紊乱、边缘不规则、呈毛刺样,α-tubulin,β-tubulin形态模糊;与PDGF-BB组比较,紫杉醇组细胞骨架荧光强度上调,F-actin平行于细胞长轴,排列较为规则,α-tubulin与β-tubulin构象清晰;三组PASMCs的微管细胞骨架α-tubulin与β-tubulin均表现为共定位。结论:1、低浓度紫杉醇促使PASMCs表型转换为收缩型细胞,抑制细胞增殖,减慢细胞迁移;低浓度紫杉醇阻滞PASMCs细胞周期进程于G2/M期,但不诱导细胞凋亡;2、低浓度紫杉醇影响PASMCs生物学行为的过程中细胞骨架微丝、微管均发生了构象变化,细胞骨架可能是药物作用点;3、低浓度紫杉醇影响PASMCs生物学行为改变这一现象,对于逆转肺血管重构具有重要意义。4、紫杉醇对于PAH有崭新而重要的应用前景,值得深入研究。