【摘 要】
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副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)引起猪多发性浆膜炎与关节炎(也称Glassers病),是近年来新发现的猪的传染病。副猪嗜血杆菌可以影响从2周龄仔猪到4月龄的青年猪,给养猪业带
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副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)引起猪多发性浆膜炎与关节炎(也称Glassers病),是近年来新发现的猪的传染病。副猪嗜血杆菌可以影响从2周龄仔猪到4月龄的青年猪,给养猪业带来严重的经济损失。本病原菌共有15个血清型,不同血清型之间无交叉保护力,给目前具有交叉保护力的疫苗的研究带来困难。目前对该菌的分子生物学研究刚刚开始,许多基因的功能尚未了解。如能通过构建突变体库,获得不同表型特征的突变菌株,将有助于对不同基因进行功能性研究。
转座技术是近年来使用广泛的一种技术,利用转座子突变的特征有以下三点:(1)转座子因为具有可选择的抗性标记而容易在体内鉴定突变;(2)经转座子诱变的突变子含有已知的DNA片段,可以通过转座子序列的杂交来鉴定突变基因的位置;(3)经转座子诱变的突变体具有高度的极性,使得被诱变的基因以及同一操纵子内的下游基因完全丧失功能。转座技术已被用于基因功能的研究。
本实验运用Tn7转座子体外转座突变Hps血清5型的染色体DNA,再电转到亲本菌株内,与亲本菌的染色体DNA同源重组。从543个转化子中利用Kan和PCR扩增插入片断的方法筛选得到20株的突变菌株,以小鼠为动物模型筛选到1株毒力减弱的突变菌株。其LD<,50>为2.93×10<9>CFU。与亲本菌株相比,毒力明显下降,用9.5×10<8>CFU突变菌株免疫小鼠,2周后分别用5×LD<,50>的野生菌(血清5型和血清4型)进行攻击,免疫小鼠对两种血清型的攻击获得一定程度的保护力。本试验为研发交叉保护力的弱毒疫苗奠定了初步的基础。
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