【摘 要】
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目的:建立凝血酶所致的星形胶质细胞损伤模型,观察还元注射液抗凝血酶对星形胶质细胞的损伤作用.方法:1.原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,传代后纯化,并以GFAP抗体鉴定;2.
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目的:建立凝血酶所致的星形胶质细胞损伤模型,观察还元注射液抗凝血酶对星形胶质细胞的损伤作用.方法:1.原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,传代后纯化,并以GFAP抗体鉴定;2.通过测定培液中的LDH值及检测凋亡百分率,量化凝血酶对星形胶质细胞损伤的剂量和时间;从形态学方面的变化对细胞损伤程度进行评估,采用MTT比色分析判断凝血酶受体抗体对凝血酶细胞毒性的阻断作用;3.采用PI染色后细胞记数、MTT比色分析及培液中LDH释放量测定,观察还元注射液对星形胶质细胞存活率的影响;以AO染色后细胞形态学变化、亚二倍体分析凋亡百分率及TUNEL检测,观察还元注射液对星形胶质细胞凋亡的保护作用;以免疫细胞比学和RT-PCR法观察还元注射液对星形胶质细胞凋亡相关基因(c-fos)及其蛋白表达的影响.结论:1.凝血酶具有神经细胞毒性,以100U/ml凝血酶作用24h,可导致星形胶质细胞损伤,但不至于细胞完全坏死,而且凝血酶的损伤与其受体途径有关;2.还元注射液可提高凝血酶所致星形胶质细胞的存活率,减轻细胞凋亡,可能与抑制c-fos的表达有关.
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