中性蛋白酶是一类最适作用pH为6.5～7.5的蛋白酶，它能将大分子蛋白质水解为肽类和游离氨基酸，被广泛应用于医药、食品和皮革等行业。本论文以米曲霉H0作为出发菌株，经紫外线、DES复合诱变，通过干酪素培养基筛选，得到一株中性蛋白酶高产菌株H2-5，其酶活力达到2158U/g，传代培养10代，菌株遗产稳定性能良好。确定了该菌株复合诱变的条件为：15W紫外灯照射，距离为25cm，照射时间为120s；DES诱变浓度为2％，诱变时间15min。通过复合诱变，筛选出一株产中性蛋白酶酶活力较高的菌株H2-5，其酶活较出发菌株提高了108.5%。研究了发酵培养条件对菌株的产酶影响：其中碳氮源、培养时间、培养温度、料水比及培养基初始pH值等对酶活影响较大；活性剂、无机盐对酶活也有影响。通过单因素实验确定了培养基组成为：碳源为麦麸、氮源为豆粕、碳氮比为4:1、料水比为5:4，确定了培养条件为：培养时间为84h、初始培养基pH值为7.5、活性剂为吐温-80、无机盐为KH₂PO₄和Na₂HPO₄、培养温度为30～32℃（前36h为32℃，后期温度为30℃），还确定了Ca²⁺对酶活的抑制作用。研究了以单因素实验结果为参照，利用响应面实验来确定多因素对米曲霉产中性蛋白酶的影响。通过响应面实验结果可知，发酵培养基的最适配方为：麦麸13.42g，豆粕3.45g，料水比1.29，中性蛋白酶产量为5561.76U/g，经过验证实验检测酶活力为5604U/g，发现模型能比较好的预测实际发酵产酶情况。研究了米曲霉高产菌株在大豆发酵中的应用，使其游离氨基酸量提高30%以上。